突破难题！多特异性抗体表达滴度提升至10g/L

抗体圈 · 公众号 · · 2025-04-07 11:47

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：最初按照标准单克隆抗体制备流程开发 BEAT#1 细胞系，结果发现其表达效果很差。7 天批次培养的微型池滴度显示，多数为非表达或低表达，14 天补料分批培养的滴度也远低于标准单克隆抗体（ 图 2 ：展示初始细胞系开发工作流程，以及 BEAT#1 和曲妥珠单抗在不同阶段的滴度对比）。

3.根本原因分析 ：研究发现，cLc 对组装完整抗体的表达有影响。将 mAb#1 和曲妥珠单抗的不同亚基组合进行瞬时转染实验，发现含有 cLc 的条件下，瞬时滴度水平下降。通过对细胞内 LC mRNA 水平和蛋白质分泌的研究表明，cLc 的翻译、折叠或组装可能是限制含有 cLc 抗体成功分泌的因素（ 图 3 ：评估 cLc 对完整抗体表达的影响，包括不同组合转染后的瞬时滴度、纯化后上清液中 LC 的相对含量以及不同表达水平细胞系内的 LC 含量对比）。

4.改进分子构建的新细胞系开发 ：评估不同密码子优化算法，发现对表达无影响；筛选不同信号肽，确定了信号肽 3、6、14、15、16 可提高表达；评估 2G UNic® 技术，发现与 GAPDH 侧翼区域结合可显著提高曲妥珠单抗表达。基于这些结果开展新的细胞系开发活动，新克隆细胞系的表达水平明显提高（ 图 4 ：展示不同信号肽和 2G UNic® 技术对表达的影响； 图 5 ：展示改进后的细胞系开发工作流程及相关滴度对比）。

5.补料分批条件的开发 ：选择合适的克隆进行上游工艺开发，优化部分参数。对于 Clone A [BEAT#1]，多种策略对滴度提升效果不佳，但温度转移至 32°C 可使培养维持至 24 天，滴度提高到 2g/L。Clone B [BEAT#1] 在平台工艺下与 Clone A [BEAT#1] 最终滴度相似，但温度转移至 32°C 时，最终滴度可达 4.5g/L（ 图 6 ：展示不同克隆在不同条件下的细胞浓度、IgG 积累和活力趋势； 图 7 ：比较不同克隆在不同条件下的总体比生产率）。