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储存稳定性差异
:在不同温度(5°C、25°C 和 40°C)下储存 3 个月后,TFF 处理的样品在聚集、流体力学半径、大小变体和粘度等方面均表现出比 SCC 处理样品更明显的变化 。例如,在 25°C 和 40°C 储存时,TFF 样品的聚集程度(以 % HMWS 表示)更高(
原文 Fig. 1,直观展示 TFF 和 SCC 样品在加速储存条件下的聚集情况差异
);40°C 储存 3 个月后,TFF 样品的流体力学半径更大(
原文 Fig. 2,呈现不同处理样品在不同储存温度下的流体力学半径变化
);在 CE - SDS 分析中,40°C 储存时 TFF 样品的降解片段浓度更高(
原文 Fig. 3,展示 TFF 和 SCC 样品在 40°C 储存 3 个月后的大小变体差异
);而且 TFF 样品的粘度在储存后显著增加,而 SCC 样品的粘度几乎不变(
原文 Fig. 4,对比 TFF 和 SCC 样品在不同储存温度下的粘度变化
) 。
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材料特性差异
:尽管两种方法制备的蛋白质溶液在生产后立即进行的常规释放检测中表现相似,但 DSF 分析显示,TFF 处理的蛋白质在较低温度下就开始与荧光染料发生相互作用,表明其三级结构发生了变化,疏水性表面暴露更多,相比 SCC 处理的蛋白质更不稳定 。而 DSC 数据未显示出两者的差异(
原文 Fig. 5 和 Fig. 6,对比 DSC 和 DSF 对 TFF 和 SCC 处理材料的分析结果
) 。
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缓冲条件和剪切应力的影响
:实验发现,在从一种缓冲液转换到另一种缓冲液的过程中,特别是在 0.5 - 1.5 倍透析体积的中间缓冲条件下,蛋白质稳定性较差。当样品处于这种中间缓冲条件并受到剪切应力时,蛋白质损失和聚集现象更为严重(
原文 Fig. 7,展示不同缓冲条件和剪切应力组合下蛋白质的损失情况
)。进一步研究发现,对较低浓度的蛋白质样品施加不同程度的剪切应力,并在 35°C 储存后,样品的聚集程度与剪切暴露相关,且蛋白质构象也发生了变化,这通过 FTIR 光谱分析得到了证实(
原文 Fig. 8,呈现剪切应力和储存温度对蛋白质聚集和构象的影响