CRISPR 技术如何改写 CHO 细胞系工程的未来？

2.提高生产力和细胞生长性能 ：为满足市场对生物制品产量的需求，提高 CHO 细胞的生产力和细胞生长性能至关重要 。研究人员尝试通过多种方式实现这一目标，如调节细胞内的 microRNAs（miRNAs） 。敲除与低生产力相关的 cgr-miR-744，可使抗体产量显著提高 。同时，针对细胞凋亡这一影响细胞生长和生产力的关键因素，研究人员对相关基因进行编辑 。例如，敲除 BCL-2 蛋白家族相关基因，可减少细胞凋亡，提高细胞活力和生产力 。此外，调节细胞的分泌能力、优化启动子、改善细胞代谢、监测内质网应激等方法，也都有助于提高蛋白质的表达和细胞的生长性能 。

3.应对外源病原体 ：尽管 CHO 细胞对人类病毒的易感性较低，但在生物制药生产过程中，仍存在病毒污染的风险 。为了降低这种风险，研究人员利用 CRISPR-Cas9 技术对 CHO 细胞进行改造 。通过敲除参与唾液酸化途径的基因，使细胞表面唾液酸缺失，从而抵抗小鼠微小病毒（MMV）的感染 。此外，调节细胞的先天免疫反应，敲除 STAT1 的负调节因子 Gfi1 和 Trim24，可增强细胞对 RNA 病毒的抵抗力 。还有研究针对 CHO 基因组中的内源性逆转录病毒（ERV）序列进行编辑，降低潜在的病毒污染风险，保障生物制药的安全性 。

4.去除宿主细胞蛋白杂质 ：宿主细胞蛋白（HCPs）是生物制药过程中的杂质，可能引发人体免疫反应，影响药品质量，必须尽可能去除 。脂蛋白脂肪酶（LPL）是一种难以去除的 HCP，研究人员运用 CRISPR-Cas9 技术敲除 LPL 基因，显著降低了其表达水平，减少了对药品稳定性的影响 。此外，对其他可能影响药品质量的 HCP，如组织蛋白酶 D（Ctsd）、膜联蛋白 A2（Anxa2）等进行基因敲除，也取得了一定成效 。通过这些研究，建立了 “清洁” 的 CHO 生产细胞系，提高了生物制药的质量和安全性 。

四、迈向无抗生素的重组蛋白生产

五、从随机整合到 CRISPR-Cas9 介导的位点特异性敲入