细胞治疗临床级hPSC的表征策略

抗体圈 · 公众号 · · 2025-06-10 16:20

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、肿瘤排斥抗原 TRA-1-60 、 TRA-1-81 以及阶段特异性胚胎抗原 SSEA3 和 SSEA4 。值得一提的是， hPSC 对小鼠多能干细胞多能性标志物 SSEA1 呈阴性。在人类中， SSEA1 在分化过程中表达，因此 hPSC 的 SSEA1 应为阴性。

3.1.1. 流式细胞术

流式细胞术已广泛用于检测各种细胞标志物。表面标志物（ TRA-1-60 、 TRA-1-81 、 SSEA3 、 SSEA4 ）更容易检测，因为抗体可以接近抗原。检测细胞内标志物（ OCT3/4 、 SOX2 、 NANOG ）的方案有一个额外的步骤，富含固定。表面标志物和细胞内标志物的组合是有利的。这种方法快速而稳健，并且结果是定量的 ; 因此，很容易在时间和不同实验室之间对它们进行比较。

许多研究者已将细胞内标志物的表征用于建立临床级 hESC 细胞系和 hiPSC 细胞系。对于放行标准尚未达成共识，因为这些标准在已发布的建立临床级 hPSC 的方案中有所不同。然而，目前正在努力确定所需的标志物数量及其阈值，以满足临床级 hPSC 细胞系的规格要求。表 2 总结了已发表论文中成功衍生 hPSCs 的放行标准。

表 2. 根据 cGMP 通过流式细胞术检测用于建立 hPSC 系的多能性标志物的放行标准总结

3.1.2. 免疫细胞化学

免疫细胞化学是一种用于检测和定位各种细胞成分的实验室检测方法。它基于一抗和二抗结合。二抗连接到荧光团，允许在荧光显微镜下检测信号。这种方法的优点是，除了抗原的存在外，我们还可以评估它在细胞内的定位。另一方面，解释是困难的；因此，与其他结果的可比性可能会有问题。其他需要考虑的要点是，这种技术需要训练有素的人员、阴性对照和严格的评估标准。

免疫细胞化学可以检测表面（ TRA-1-60 、 TRA-1-81 、 SSEA3 、 SSEA4 ）和细胞内多能性标志物（ OCT3/4 、 SOX2 、 NANOG ）。表面标志物和细胞内标志物的组合是受欢迎的，但根据国际干细胞倡议的 hESC 和 hiPSC 表征指南，免疫细胞化学建议仅用于信息目的。

一些研究者使用免疫细胞化学检测临床级 hESC 系的多能标志物。阈值的确定很困难；尽管如此，被引作者还是公布了他们的发布标准，如表 3 所示。

表 3. 根据 cGMP 通过免疫细胞化学检测用于建立 hPSC 系的多能性标志物的放行标准总结

3.1.3. 碱性磷酸酶

碱性磷酸酶（ AP ）染色是成功建立 hPSC 细胞系的早期标志物。 hPSC 表达大量的 AP ，这可以通过显色底物观察到。该测试快速且易于执行，在显微镜下检查菌落的阳性，但肉眼也可见。

3.2. 基因检测

3.2.1. 指纹识别

各种 hPSC 细胞系的区分不仅对于实验目的至关重要，而且主要在临床使用中也至关重要。培养的 hPSC 细胞系之间存在不必要的转换或交叉污染的风险，在定向分化并随后移植到人类的情况下，这可能会危及生命。特定 hPSC 细胞系的鉴定必须明确，因此分析短串联重复序列（ STR ）基因座。市面上有许多用于细胞系鉴定的试剂盒，但对于少数 STR 谱，值得考虑将 DNA 样本送到认可的实验室。

在建立 hiPSC 系的情况下， STR 谱应与细胞供体匹配，但对于 hESC 系，这种联系是不可能建立的，因为在衍生时细胞不多。但是，建议在早期传代中建立 STR 谱，因为它可以帮助识别不需要的转换或交叉污染。

根据 ANSI/ATCCASN-0002-2011 标准，应使用至少 8 个阈值匹配的 8 个核心 STR 基因座来鉴定人类细胞系。然而，可能需要 15 个 STR 位点才能明确识别 hPSC 的自体用途。