正文
1. 脂滴与线粒体共定位成像（Co-localization Imaging）
利用共聚焦显微镜结合脂滴染料（例如 BODIPY）和线粒体染料（例如 MitoTracker），可实现脂滴与线粒体在细胞内空间位置的可视化和共定位分析。通过计算共定位系数评估二者互作紧密度，揭示功能性关联。
2. 高分辨率电子显微镜（Transmission Electron Microscopy, TEM）
通过 TEM 技术可以观察脂滴与线粒体的超微结构及其接触界面，揭示互作形态特征。定量分析接触面积和膜结构变化，有助于解析脂滴-线粒体互作在不同生理病理状态下的动态变化。
3. 脂滴-线粒体接触蛋白检测（Proximity Ligation Assay, PLA）
利用 PLA 技术检测脂滴相关蛋白（例如 PLINs）与线粒体蛋白（例如 Mfn2）之间的近距离互作。通过荧光信号的出现与分布，定量评估蛋白水平的物理互作，反映脂滴-线粒体功能联系。
4. 脂滴大小与数量分析（Lipid Droplet Morphology Analysis）
通过 BODIPY 染色结合高内涵成像（HCS）系统定量分析脂滴大小、数量及分布。指标变化反映脂滴动态调控能力，与线粒体代谢状态密切相关。
5. 质谱分析（Mass Spectrometry）
质谱分析技术可以识别脂滴和线粒体相互作用的分子标记物，分析脂肪酸的种类及其在细胞中的分布。通过这种技术，可以精确了解脂滴中的脂质成分，包括脂肪酸成分、脂质类型、脂肪酸氧化产物的变化。
6. 线粒体呼吸功能测定（Seahorse XF Analyzer）
使用 Seahorse 代谢分析仪测量细胞的氧气消耗率（OCR）和糖酵解率（ECAR）。可量化脂滴供能后线粒体呼吸活性变化，反映互作对能量代谢的影响。
7. 活性氧水平检测（ROS Detection Assay）
利用 DHE 或 MitoSOX 等荧光探针检测细胞或线粒体内 ROS 水平。评估脂滴-线粒体互作对氧化应激状态的调控，揭示互作失衡是否加剧氧化损伤。
8. 活细胞成像技术（Live-cell Imaging）
利用 MitoTracker 和 BODIPY 等荧光探针，实时监测脂滴与线粒体的动态变化及互作过程。评估脂滴-线粒体互作在细胞内的时空分布特征，揭示互作动态失衡与脂质代谢紊乱的关联机制。
三、【结果分析】脂滴与线粒体互作的实验结果怎么看？
下面我们来举 2 个例子带大家一键理解脂滴与线粒体互作的实验结果。
1. 以 Huh7 细胞为研究对象，予以或不予以处理葡萄糖剥夺（40 分钟），利用免疫共沉淀（Co-IP）技术，使用抗 PLIN2 和抗 CPT1A 的特异性抗体进行免疫沉淀。此外，使用 mCherry 标记 PLIN2（脂滴标志物）和 GFP 标记 CPT1A（线粒体标志物），并通过通过共聚焦显微镜观察脂滴与线粒体的共定位。为进一步探究 CPT1A 对两者互作的影响，利用 shRNA 敲低 CPT1A 表达，利用免疫荧光技术进行脂滴和线粒体的共定位分析（PMID：38773347，《Natural metabolism》，中科院 1 区，IF = 19.2）。
（1）数据点解析
①葡萄糖剥夺增强 PLIN2 与 CPT1A 的结合：在 Huh7 细胞中，通过免疫共沉淀（Co-IP）实验检测发现，葡萄糖剥夺处理后，脂滴标志蛋白 PLIN2 与线粒体外膜蛋白 CPT1A 的结合显著增强，而 PLIN3 与 CPT1A 的结合未见明显变化（图 a）。
②葡萄糖剥夺促进脂滴与线粒体的共定位：利用共聚焦活细胞成像技术观察到，葡萄糖剥夺处理后，脂滴（PLIN2 标记）与线粒体（CPT1A 标记）之间的共定位比例随处理时间延长（10, 20, 40 分钟）逐渐增加，脂滴-线粒体互作显著增强（图 b）
③敲低 CPT1A 抑制脂滴-线粒体互作的形成：通过 shRNA 干扰敲低 CPT1A 表达后，葡萄糖剥夺条件下脂滴（LiveDrop 标记）与线粒体（MitoTracker 标记）的共定位明显减少，脂滴与线粒体之间的接触显著受阻（图 c）。
（2）分析结论
