CHO细胞灌流工艺缩小模型的开发策略

图2 摇管模型示意图 [2]

摇管模型虽看起来操作简单，仍有许多细节需要注意。例如，建议在实验开始前摸索细胞峰值密度，当细胞在固定灌流条件下密度不再增长，此时认为细胞已达此工艺下的密度峰值，将细胞密度维持在细胞峰值的80-90%左右，并以此为均值进行bleed操作；细胞特异性灌流速率（CSPR）是指单个细胞每天可获得的新鲜培养基体积，建议正式实验开始前，摸索合适的CSPR：按照不同CSPR计算所需更换的体积，将各管中的细胞悬液离心，取出相应体积的上清并补入相同体积的新鲜培养基重悬细胞后继续培养，通过监测细胞生长、产物表达等指标确定合适的CSPR，此步骤可最大程度上减少培养基消耗，且研究表明CSPR对细胞生长状态有显著影响，与抗体蛋白表达密切相关。

图3 DurePro ^® HD灌流培养基摇管条件下生长曲线

图4 DurePro ^® HD灌流培养基表达量

（灌流速率1 VVD，单日蛋白表达水平最高可达流加批式产量的80%）

在生物制药行业，摇管半连续灌流模型可用于前期克隆以及培养基筛选、工艺参数优化等工作，大幅减少培养基消耗，降低实验成本。摇管模型尽管规模较小，但能在一定程度上重现灌流培养过程的关键特征，如支持高细胞密度以及长时间培养的能力，通过该模型获得的数据可为后期大规模生产提供参考，降低大规模生产风险。