正文
TEM
（
图
1b-e
）
和
RT-qPCR
（
图
1f
）
结果均表明
热老化
MPs
免疫活性更强。尽管不同聚合物（如
PP
与
PS
）诱导的免疫反应相似，说明聚合物类型并非主要决定因素，但
PSC
的吞噬效率及促炎基因表达均显著高于
A-EX-PP
（
图
1b-f
）。此差异可能与粒径相关：
PSC
为
500 nm
（接近
SUFC
浸出液
MPs
实际尺寸），而
A-EX-PP
为
6.8 μm
，表明小尺寸颗粒更易被吞噬并激活炎症信号。基于此，选择
PS
（原始
MPs
）和
PSC
（热老化
MPs
）作为模型，以更真实模拟环境
MPs
特性，用于后续先天免疫机制研究。
图
1
PS
和
PSC
可分别作为原始和热老化
PP MPs
的替代物。
（
a
）
PP SUFC
浸出液
MPs
的
ATR-FTIR
光谱；
RAW264.7
巨噬细胞摄取（
b
）
EX-PP
（
c
）
A-EX-PP
（
d
）
PS
（
e
）
PSC
的
TEM
图；（
f
）
RAW264.7
巨噬细胞
促炎症基因表达水平。
MPs
在生物流体中通常会结合血清蛋白形成
MPs-
蛋白冠复合物，且老化促进
MPs
的蛋白吸附。这提示进一步探究蛋白冠与热老化增强
MPs
先天免疫效应
关系的重要性。随后将
PS
和
PSC
与
10%
胎牛血清在
37
℃
下孵育
6
小时，以评估
PSC
是否结合更多血清蛋白。
TEM
（
图
2a
）和
SDS-PAGE
（
图
2b
）结果表明热老化增强
MPs
对血清蛋白的吸附。为进一步研究原始
MPs
和老化
MPs
蛋白冠复合物对先天免疫应答的影响，
RAW264.7
巨噬细胞分别与
PS&Corona
和
PSC&Corona
在无血清培养基中共培养。对于吞噬作用，共聚焦显微镜（
图
2c
）和流式细胞术（
图
2d
）结果显示在相同浓度下，巨噬细胞对
PSC&Corona
复合物的摄取高于
PS&Corona
复合物。促炎反应方面，与
PS&Corona
处理组相比，
PSC&Corona RAW264.7 Møs
中
mRNA
表达水平显著上调（
P
< 0.05
）（
图
2e
）。这些结果表明，热老化
MPs
通过吸附更多血清蛋白来激活先天免疫反应。
图
2
PSC&Corona
诱导更强烈先天免疫效应。（
a
）
TEM
图像，比尺：
200 nm
；（
b
）
SDS-PAGE
凝胶分析；（
c
）共聚焦图像，①、②、③分别代表
Control
组、
PS&Corona
组和
PSC&Corona
组，比例尺：
25 μm
；（
d
）流式细胞术；（
e
）促炎基因表达。
为探究
PSC&Corona
对
RAW264.7
巨噬细胞的免疫调节机制，通过
RNA-seq
转录组分析发现：差异表达基因（
DEGs
）在
GO
富集中显著富集
“
血管生成
”
条目，其中促炎标志物内皮素
-1
表达较对照组上调
3.7
倍（
图
3a
），提示
PSC&Corona
诱导的
DEGs
具有促炎活性。
KEGG
富集分析显示，趋化因子信号通路是激活先天免疫的关键机制（
图
3b
）。趋化因子通过调控巨噬细胞趋化迁移促进吞噬作用。研究发现，
PSC&Corona
通过特异性上调
LOX1
受体（
Olr1
）及
CXCR4
受体（表达量较对照组高
1.6
倍）被巨噬细胞识别。受体结合触发肌动蛋白聚合，形成吞噬体包裹颗粒，同时激活
SRC
激酶（上调
1.5
倍）和
AP-1
转录因子（
Fosb
上调
3.2
倍），通过氧化还原敏感通路（如
AP-1
）驱动炎症基因转录。肌动蛋白聚合在此过程中兼具结构性与功能性双重作用：既作为吞噬的结构基础，又通过
SRC-AP-1
信号轴介导促炎反应，成为吞噬与炎症间的关键交联机制。为验证该机制，采用细胞松弛素
B
破坏肌动蛋白骨架后，巨噬细胞对
PSC&Corona
的吞噬能力显著下降（
图
3c
），且促炎因子
NOS2
和
MCP1
的
mRNA
表达
水平
分别降低
1.5
倍和
1.3
倍（
P
<
0.01
）（
图
3
d
），进一步证实肌动蛋白聚合是热老化
MPs-
蛋白冠复合物激活先天免疫的核心
机制
。
图
3
PSC&Corona
通过活化肌动蛋白聚合诱导
RAW264.7
巨噬细胞的吞噬和促炎反应。差异表达基因的（
a
）
GO
（
b
）
KEGG
富集分析；细胞松弛素
