必看！解决高密度细胞培养收获液澄清难题的妙招

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过滤实验 ：在确定最佳絮凝条件后，对约 4 L 的细胞培养收获液进行处理 。一组用 pDADMAC 处理后，通过专门为处理絮凝或沉淀进料流设计的预处理适配深度过滤器（Clarisolve20MS、40MS 和 60HX）进行过滤；另一组未处理的收获液则使用传统的硅藻土深度过滤器（Millistak D0HC 和 X0HC）过滤 。通过恒定流率法评估各深度过滤器的容量，记录过滤过程中的压差、累积滤液体积和浊度等数据 。同时，测定无菌过滤阶段的相关参数，评估滤液质量 。

分析检测方法 ：采用多种分析方法对实验样品进行检测 。用便携式浊度计测量浊度；使用基于 COBAS INTEGRA 400 plus 的 IgG 检测法测定产物浓度；通过 ELISA 法检测 HCP 水平，并计算 HCP 清除率；运用定量 PCR（qPCR）检测残留宿主细胞 DNA，并计算 DNA 清除率；使用库尔特计数器测量颗粒尺寸分布；利用表面等离子共振技术（SPR）检测残留 pDADMAC 的含量（ 插入原文中关于各种检测方法的原理示意图，帮助读者理解检测过程 ） 。

三、实验结果与讨论

1. 絮凝优化研究 ：向含有 mAb1 或 mAb2 的细胞培养液中加入不同量的 pDADMAC 后，发现与未处理的进料相比，浊度明显降低，这表明 pDADMAC 能有效絮凝细胞和细胞碎片 。随着 pDADMAC 浓度增加，浊度先是下降，在 0.05% wt% 时达到最低，之后过高浓度又会使浊度上升 （ 插入原文 Fig. 2，展示浊度和回收率随 pDADMAC 浓度变化的曲线，直观呈现实验结果 ）。这可能是因为絮凝剂用量与细胞密度有关，高浓度时可能影响絮凝物性质 。在所有测试的絮凝条件下，均未检测到产物损失，且过滤后上清液中蛋白质浓度回收率超过 98% 。不过，当 pDADMAC 浓度超过 0.05% wt% 时，产物回收率出现异常增加，可能是残留聚合物干扰了 IgG 定量检测，用 Protein A 色谱法检测则未出现该现象。

   

2. 聚合物对颗粒尺寸分布的影响 ：对 mAb3 收获液絮凝前后的颗粒尺寸分布进行分析（ 原文 Fig. 3，呈现未处理和 pDADMAC 处理后的细胞培养液颗粒尺寸分布 ），发现未处理的细胞培养液中平均颗粒直径约为 22μm 。加入 pDADMAC 后，颗粒尺寸分布向更大、可能更致密的絮凝物转移，但高剂量的 pDADMAC 并未使颗粒直径大于 22μm，反而使平均尺寸降至约 20μm，同时 10μm 左右的颗粒体积增加 。这表明高剂量的聚合物会使较大尺寸的聚集体不稳定，与高剂量絮凝时离心液浊度增加的现象相呼应 。此外，未处理进料流中存在难以用传统分离技术去除的小颗粒，pDADMAC 介导的絮凝作用可能使这些颗粒得到稳定 。

   

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