消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞多药耐药相关蛋白的调控作用

中草药杂志社 · 公众号 · 药品 · 2017-07-07 14:51

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Mini Trans-Blot Module 电泳转印芯、 PowerPac Basic Power Supply 基础电泳仪（ Bio-Rad 公司）； Epgiadients PCR 仪（ Eppendorf 公司）； ABI7500 fast 荧光定量 PCR 仪（ Life Technologies 公司）； FluorChem FC2 成像分析系统、 AlphaView 系统软件（ Alpha Innotech 公司）。

1.5 细胞培养

细胞复苏、传代与培养参照文献报道方法 ^[4] 。复苏后的人肺腺癌 A549 、 A549/DDP 细胞，分别接种于 50 mL 培养瓶，加入 RPMI 1640 培养液（含 10% 胎牛血清，青霉素、链霉素各 100 U/mL ） 6 mL ，置于 37 ℃、饱和湿度、含 5%CO ₂ 的孵箱中无菌培养， A549/DDP 细胞则在 2μg/mL DDP 的 RPMI 1640 培养基中诱导培养，实验前 2 d ，更换成无 DDP 的培养基培养。

1.6 A549 裸鼠皮下移植瘤模型的建立

体外复苏、培养 A549 细胞，在对数生长期收集细胞。 1000 r/min ，离心 5 min ， PBS 溶液洗涤 2 次，离心弃上清，离心管外周以冰袋维持温度在 4 ℃左右，以此来保持细胞活性。用生理盐水稀释，调整细胞浓度到 5 × 10 ⁶ 个 /mL 。 80 只裸鼠按照随机数字法随机分为 4 组，每组 20 只，在各组中每只裸鼠右前腋下 sc 接种 0.2 mL 。待所有裸鼠的皮下肿瘤的平均直径达到约 5 mm 时开始给药，每次给药间隔 24 h 。顺铂组 ip 给予 2 mg/kg 顺铂，消岩汤低、高剂量组分别 ig 给予消岩汤水煎液 20 、 40 g/kg ^[2] ，对照组小鼠 ig 给予 40 g/kg 生理盐水。连续给药 10 d 后眼眶取血法采血。

1.7 消岩汤含药血清的制备

末次 ig 给药 1 h 后，小鼠称定体质量，眼眶取血法采血， 8 000 r/min ，离心 15 min ，取淡蓝色血清于 2 mL EP 管中，标识组别。 14 000 r/min ，高速离心 5 min ，重复 2 次。分别提取上清，分装， 56 ℃水浴灭活 30 min ，用 0.22 μm 微孔滤膜滤过除菌， −20 ℃保存。