CRISPR 改写 CHO 细胞工厂：从 “低效” 到 “高产” 的基因手术

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：表观遗传调控，如融合 DNA 甲基转移酶（DNMT3A）沉默 FUT8 ，实现岩藻糖修饰动态调控（ 图3I ）。

二、代谢与通路工程：提升产率的双重引擎

2.1 抗凋亡与生长优化

通过 CRISPR 敲除 BAK 、 BAX 等促凋亡基因，可延长 CHO 细胞培养周期，提升活细胞密度。例如，三基因敲除（BAK/BAX/CYLD）使细胞存活期延长 5 天，抗体产率提升 105%-228%（ 表1 ）。同时，敲除 TSC2 激活 mTOR 通路，可使蛋白产率翻倍，且不影响细胞活力（ 图2B ）。

2.2 代谢流重编程

CRISPR 技术可优化碳源利用路径，减少乳酸和氨等毒性代谢物积累。敲除 LDHA （乳酸脱氢酶）可使乳酸生成减少 22%-50%，同时增强 TCA 循环活性，提升能量代谢效率（ 图 2D ）。此外，敲除 HPD 和 GAD2 可降低氨生成，使整合活细胞密度（IVCD）提升 26%（ 表1 ）。

2.3 糖基化工程：精准调控蛋白质量

糖基化修饰直接影响蛋白疗效。通过敲除 FUT8 或 SLC35C1 阻断岩藻糖转移，可制备去岩藻糖抗体，ADCC 活性提升 100 倍（ 表2 ）。同时，敲除 ST3GAL4/6 并过表达 ST6GAL1 ，可将 IgG 的 α-2,6 唾液酸修饰从 5% 提升至 77%，显著增强抗体依赖性细胞吞噬作用（ADCP）（

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