正文
操作，这是本文的重点。在每个阶段，都需要建立适当的过程控制和分析方法。
方案1.ADC DS生产的代表性工艺流程图
虽然
mAb
的
UF/DF
的一些一般原则可以应用于
ADC
，但后者存在许多差异和挑战（表
1
）
表
1.mAb
和
ADC
在蛋白质结构以及
UF/DF
在各自过程中的重要性和作用方面的差异
mAb
的纯化技术到现在已经有了成熟的单元操作和关于杂质清除方法。相比之下，目前关于
ADC
纯化的文献较少，详细介绍
UF/DF
在偶联后纯化中应用的文献相对较少。
Liao
及其同事在抗体溶液的模型系统中证明了
UF/DF
有效清除了几种小分子试剂和溶剂。药物接头相关物种的清除对每个
ADC
程序都是特异性的，不包括在他们的研究范围内。在临床前
ADC
候选药物的早期工艺开发过程中，
Mendelsohn
及其同事报告了一种克级
ADC
合成，其中使用
UF/DF
高效清除了小分子杂质。
Nadkarni
及其同事评估了
UF/DF
从另一个
ADC
中去除未偶联的药物接头。然而，在本案中，母体药物接头不能被完全去除；因此，
在
UF/DF
之前添加了硫醇基淬灭剂以将其转化为更亲水性的衍生物。观察到药物接头清除曲线对淬灭剂性质的有趣依赖性，其中
L-
半胱氨酸最有效。
洗滤过程的效率可以通过充分去除先前的缓冲液成分并将产品交换为目标缓冲液成分所需的次体积数量（
DV
，洗滤缓冲液与产品体积的相对体积）来量化。
mAb
工艺的典型范围为
6
至
10
个
DV
，理论缓冲液置换率达到
99.75%
或更高。
对于
ADC
工艺，预计
UF/DF
步骤可能需要更多的
DV
，以确保已知和假定的细胞毒性小分子杂质降低到可接受的水平，尤其是在滤膜上分配不理想的情况下
。
2018
年发表的一份关于
ADC
中小分子杂质控制策略的文件。这些文献概述了一套原则，通过这些原则，可以证明在为药物接头中间体设定规格时的灵活性是合理的，特别是在定义高于现有新原料药和产品监管指南规定的小分子杂质限值方面。本文中的关键假设之一是，在随后的
UF/DF
偶联后纯化过程中，不与
mAb
偶联的小分子杂质被有效去除至低于任何关注水平。在许多情况下，情况确实如此，因为我们之前调查的数据表明，
大多数公司在纯化后能够将
ADC DS
中的小分子杂质水平降低到
0.1%
以下（基于重量
/
重量）。
然而，确实出现了上面讨论的例子，这表明杂质清除可能更复杂，需要额外的考虑。
当偶联后存在的杂质类型和水平可能高度可变时，定义杂质去除的
“
效率
”
是一个挑战。尽管如此，能够根据去除的难易程度对杂质进行分类，对于加速设计有效的纯化策略具有价值，有助于在工艺和控制策略开发过程中集中精力。本文的一个具体目标是应用收集的信息来评估不可偶联的小分子杂质确实可以被
UF/DF
有效清除的假设。本文还试图通过更广泛地了解工业公司如何使用
UF/DF
进行偶联后纯化的技术方面来填补当前文献中的空白，并为有效去除杂质提供实用建议。
【NO.2】调查结果和讨论
2.1 范围和方法
向
IQ
联盟的成员公司（尤其是具有
ADC
经验的公司）发送了一份调查，其中包含
12
个问题，涵盖五大类：杂质分类和去除难易程度、
UF/DF
作参数和平台方法、分析分析和产品质量属性（
PQA
）、生产规模的挑战和新兴技术。重点是用于肿瘤适应症（特别是
ICHS9
范围内的适应症）和小分子药物有效载荷的
ADC
的偶联后纯化。
ADC
承载的更大的寡核苷酸或肽
/
蛋白等有效载荷为纯化带来了额外的挑战，但不在本文的讨论范围之内。
2.2 使用
UF/DF
进行杂质分类和易于清除
为了探究
UF/DF
在后偶联过程中去除不同类别杂质的效率，调查中的三个问题要求受访公司：
（
1
）选择他们认为最难去除的三种杂质类型
;
（
2
）说明单独使用
UF/DF
是否可以充分去除这些杂质，或者通常需要额外的纯化步骤（例如层析）
;
（
3
）强调公司为改善这些杂质去除而实施的任何优化方法。
“
最具挑战性
”
和
“
充分移除
”
是主观术语；因此，结果会受到公司个人经验的影响。
尽管如此，综合数据提供了有用的视角和背景。表
2
总结了前两个问题的结果，第三个问题的回答包含在下面的讨论中。
表
2.
受访者对
UF/DF
后偶联过程中去除不同类型杂质的相对难度的评估
溶剂和反离子被评为最容易去除杂质，其次是小分子试剂和副产品。
UF/DF
通常能够将这些材料清除至低水平，而几乎不需要优化参数（例如，仅修改缓冲液追踪步骤以提高产量）。在一项关于
mAb
抗原结合片段的
UF/DF
研究中，柠檬酸根离子的清除率降低（由于与产物蛋白的特异性相互作用），但调查受访者并未强调这是
ADC
加工中对反离子的关注点。溶剂（例如二甲基亚砜（
DMSO
）或乙二醇）和残留的小分子试剂（尤其是那些水溶性更强的试剂，例如三（
2-
羧乙基）膦或脱氢抗坏血酸）预计会在最初的几个
DV
中降低到低水平。请注意，
粗
ADC
输入中的杂质含量较高，和
/
或所得纯化材料中的限值更严格，会增加
UF/DF
