dPCR 标准化之路的机遇与挑战

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参考物质是具有足够均匀性和稳定性的材料，用于校准测量系统和质控。其中， certified reference material（CRM）需通过计量学 valid 程序认证，附带不确定度和溯源性声明。例如，NIST 开发的 SRM 2373 和 RM 8366 通过 dPCR 定值，用于癌症基因拷贝数检测的校准。

2.2 dPCR 对传统方法的革新

在 dPCR 普及前，紫外光谱法、核酸结合染料等间接方法常用于核酸定量，但这些方法无法区分目标序列与杂质，且易受样本基质影响。dPCR 则通过 特异性扩增 直接测量目标序列，尤其适用于复杂基质中低丰度核酸的表征，如血浆游离 DNA 或病毒 RNA。

三、dPCR 测量准确性的影响因素

3.1 实验设计的关键要素

• 引物与探针优化 ：需验证退火温度、浓度及多通道检测时的光谱干扰，避免 “通道串扰”。

• 分区体积校准 ：仪器标称体积可能存在偏差，计量机构需通过实验测量实际体积，以降低浓度计算误差。

• 参考基因选择 ：在比值测量（如癌症基因拷贝数）中，需确保参考基因拷贝数稳定，避免因基因组变异导致结果偏移。

3.2 样本前处理的技术要点

• 核酸完整性 ：环状质粒需线性化以提高扩增效率，基因组 DNA 可通过酶消化或超声破碎减少二级结构影响。

• 抑制物控制

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