提升 CHO 细胞重组蛋白产量的 “双密钥”

抗体圈 · 公众号 · · 2025-05-28 16:37

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：以鼠基因组序列为参考，设计针对 Apaf1 基因的 sgRNA，利用 CRISPR/Cas9 系统表达载体 PX459，经酶切、连接、测序等步骤构建 Apaf1 基因敲除载体。将其转入 CHO-S 细胞，经嘌呤霉素筛选、有限稀释法获得单克隆细胞株，并通过 PCR、qPCR、Western blot 等技术验证 Apaf1 基因的敲除情况。

   
       三、实验结果：重组蛋白表达显著提升

调控元件的作用 ：添加调控元件的载体转染 CHO-S 细胞后，eGFP 绿色荧光强度和相对平均荧光强度（MFI）值显著增强，SEAP 和 IL-3 的瞬时表达和稳定表达水平均大幅提高（图 1、图 2）。

Apaf1 基因敲除效果 ：成功筛选出 CHO-KO-1、CHO-KO-2 和 CHO-KO-3 三株 Apaf1 基因敲除单克隆细胞。经检测，其 Apaf1 基因的 mRNA 转录水平和蛋白表达水平均显著低于野生型 CHO 细胞。敲除 Apaf1 基因不影响细胞生长，且使细胞凋亡比例显著降低（图 3、图 4）。

新型表达系统的优势 ：将优化后的载体与 Apaf1 基因敲除的 CHO-KO-3 细胞结合，构建新型 CHO 细胞表达系统。与野生型细胞相比，该系统中转染不同载体的 eGFP、SEAP 和 IL-3 的表达水平均显著提高，且稳定表达时基因拷贝数与表达水平相关，而瞬时表达水平的提高与基因拷贝数无关。