工业级稳定细胞株开发的全流程技术要点与GMP合规要求

培训大纲

第一天 09:00-12:00 13:30-16:30

模块一：工业级稳定细胞株开发核心策略 9:00-12:00

1企业需求导向的技术路线设计

2目标产物性质分析（蛋白类型、表达量、糖基化需求）→ 表达系统选择（CHO vs. HEK293）。

成本效益分析：载体设计对克隆稳定性、培养周期、产物得率的影响。

3载体设计与工业优化

4工业载体核心元件：强启动子（如EF1α）、整合位点优化（TALEN/CRISPR靶向插入）。

5多顺反子设计（分泌信号肽+产物基因+选择标记）与密码子优化策略。

6企业案例：通过载体改造提升CHO细胞单克隆表达量（从5pg/cell/day到20pg/cell/day）。

模块二： GMP 合规与工艺验证 13:30-16:30

1GMP规范下的细胞株开发

2细胞库建立流程的GMP要求（MCB/WCB的隔离、检测、文档管理）。

3生产用细胞株的克隆源性验证（有限稀释法+NGS全基因组测序）。

4工艺验证与稳定性研究

5细胞株稳定性测试：传代稳定性（基因拷贝数、表达量）、冻存复苏稳定性。

6工艺验证参数：细胞培养规模放大（摇瓶→生物反应器）的DOE设计。

主讲老师：林博士 中科院深圳先进院博士后， 工艺 总监。近10年研发经验，负责建立与优化高效细胞株开发平台，最快6个月获批临床。曾负责与参与各类生物制品的立项与工程细胞株开发工作，其中3项获批上市/紧急使用，多项进入IND与BLA。擅长成药性评估、工程细胞株开发与鉴定、细胞工艺开发以及完整申报工作。多年早期研发经验，曾发表SCI-11篇，专利-5件。

第二天 09:00-12:00 13:30-16:30

模块三：规模化生产与成本控制 9:00-12:00

1从实验室到生产车间的技术转移

2小试工艺放大策略：溶氧调控、补料策略、搅拌速率适配。

3生产用培养基与补料优化：企业供应商评估与成本压缩方案。

4降低生产成本的关键技术

5高密度细胞培养技术（灌流培养与连续生物工艺的整合）。

6细胞株筛选策略：单克隆源性验证与快速筛选技术（微流控分选、AI表型预测）。

模块四：企业实战问题与解决方案 13:30-16:30

常见工业级问题剖析

问题1：克隆稳定性差（基因组整合位点丢失）→ 解决方案：CRISPR靶向敲入+表观遗传调控。

问题2：产物聚集/降解 → 解决方案：添加分子伴侣（如GroEL）或优化培养条件（pH/溶氧）。

问题3：批次一致性差 → 解决方案：工艺参数RSD控制与在线监测系统应用。

风险管理与应急预案

细胞株污染风险：支原体检测（qPCR法）与清洁验证。

技术转移失败应对：备份细胞株管理与快速工艺恢复方案。