一文读懂国内首个动物病原微生物tNGS专家共识

IVD从业者网 · 公众号 · · 2025-06-14 11:30

正文

3.2 靶标及引物之间最低干扰原则

第一，保证病原靶标基因间同源性较低或无同源性；第二，保证引物间同源性较低或无同源性。若第一点无法满足，则设计引物时必须满足第二点，确保引物间不存在交叉。

3.3 引物长度控制原则

每对引物的扩增长度需控制在 200 bp以内 ，以 100-200 bp 为宜，以达到高效、特异地对靶标基因进行靶向扩增。

3.4 靶点区域选择原则

对于保守鉴定基因，选择高特异性区域为引物扩增区；对于突变基因，则选择高突变区域为引物扩增区。各靶标基因设计的引物对数应根据需要覆盖区域进行调整。

4.1 样品采集与运输

4.2 样品前处理

提取效率：真菌 > 革兰阳性菌 > 革兰阴性菌 > 病毒。方法：溶液型抽提、柱式抽提、磁珠纯化法。

实验室应充分评估各提取方法/试剂性能，选择最合适的。

4.2.2 核酸质量评估

4.3 测序文库构建

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