Nature Biotechnology | 细胞治疗新突破：SEED-Selection带来更高效...

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SEED-Selection技术的核心思想是在基因编辑的同时，破坏一个内源性表面蛋白的表达，并利用这一表面蛋白的缺失进行负向筛选，以富集完全编辑的T细胞。

目标基因敲入与表面蛋白破坏

研究人员设计了一种特殊的修复模板（homology-directed repair template, HDRT），使其在目标基因敲入（knock-in, KI）的同时，破坏一个内源性表面蛋白的表达。最常被破坏的表面蛋白包括：

T细胞受体（TCR）： TCR是T细胞特异性识别抗原的关键分子，去除TCR可降低异基因T细胞的免疫排斥反应。

β2微球蛋白（B2M）： B2M是MHC-I复合物的组成部分，其缺失可阻止T细胞被宿主免疫系统识别。

当目标基因成功敲入后，这些表面蛋白会失去表达，从而可以利用免疫磁珠（immunomagnetic selection）或流式细胞分选（FACS）去除未被完全编辑的细胞，仅保留那些成功敲入目标基因的T细胞。

负向筛选提高T细胞纯度

研究人员利用免疫磁珠技术，以TCR或B2M的表达缺失为标记，去除所有未完全编辑的T细胞。例如：

若在TRAC基因（TCR-α恒定区）上插入CAR基因，同时破坏TCR的表达，则所有TCR⁺的细胞可通过磁珠去除，仅保留TCR⁻CAR⁺的完全编辑T细胞。

若在B2M位点敲入CD47基因，同时破坏B2M的表达，则B2M⁺的细胞可被去除，最终获得B2M⁻CD47⁺的高纯度T细胞。

适用于多基因编辑

SEED-Selection的优势在于它可以同时编辑多个基因位点。例如，在同一批T细胞中： 可在TRAC位点敲入CAR，同时破坏TCR。 可在B2M位点敲入CD47，同时破坏B2M。

通过两步负向筛选（去除TCR⁺和B2M⁺的细胞），最终可获得高纯度的TCR⁻CAR⁺B2M⁻CD47⁺T细胞。

SEED-Selection的实验数据

研究人员通过一系列实验验证了SEED-Selection的有效性，并用多个基因编辑策略对比评估其筛选效果。

单基因敲入的富集效果

实验数据显示， 在TRAC位点敲入CAR，并通过TCR⁻筛选后，最终获得92.6%纯度的TCR⁻CAR⁺T细胞。 在B2M位点敲入CD47，并通过B2M⁻筛选后，获得98%纯度的B2M⁻CD47⁺T细胞。

多基因座同时编辑的高效筛选

在TRAC和B2M两个基因位点同时敲入外源基因后，双重负向筛选可获得89.4%纯度的TCR⁻CAR⁺B2M⁻CD47⁺T细胞，远超传统筛选方法的效率。

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