《现代液相色谱技术导论》读书笔记

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可电离的样品，分析生物大分子

离子对色谱（ IPC ）

非极性（ C18 ）

流动性加入带相反电荷样品的离子作用的离子对试剂

反相色谱中保留较弱的酸或碱

尺寸排阻色谱法（ SEC ）

惰性的色谱柱

水或有机相

基于样品分子大小分离；分离分子大分子或者合成聚合物

二：色谱分离的过程

1.基本概念

假定含有三种不同化合物分离， ● 代表化合物 X， ▲ 代表化合物 Y， □ 代表化合物 Z。如图中没有显示流动相分析，溶解样品的溶剂分子用+代替。当样品进样到图a的色谱柱上，有流动相带动，在不同阶段内留个色谱柱，然后离开色谱柱进入检测器如图e ，并生成一个检测器响应对应时间作图的结果（色谱图）。当样品在色谱柱中（图 a~d），样品XYZ分子展现出两种行为：差异移动和分子扩散。

当一个给定的溶质分子通过色谱柱时，这些分子迅速扩散，占据色谱柱中大部分体积。

给定溶质分子在色谱柱里所占的体积定义为色谱带。

当色谱带离开色谱柱时，它就在色谱图中被记录下来，为色谱峰。

每个色谱峰的身份可以由他们通过色谱柱的时间来定义（保留时间）。保留时间是指样品进样后到出现色谱峰顶端时的时间段。

溶剂峰的保留时间是色谱柱的死时间。

保留因子 k：固定相中的溶质分子总量除以流动相中溶质分子总量。

或者

其中： t _R: 保留时间

t _0： 死时间

其中： t ₀ =Vm/F，F为流速ml/min，Vm为色谱柱内流动相总和 。

Vm≈5*10 ^-4 Ld ² L ：柱长 mm；d：内径mm

2.分离条件和样品组成的角色

反相色谱法中使用非极性的色谱柱和极性的含水的流动相。极性的溶质分子喜欢极性的流动相（物以类聚）而保留程度较低（较大的 R值，较小的K值），而非极性的溶质分子会倾向和非极性的固定相相互作用并能保持更久。反相色谱柱的流动相通常是由水或水性缓冲盐（A相）和有机溶剂（B相）组成。当有机溶剂增加时，所有样品化合物的保留都会减少。%B值改变+10%，K值一般会减少到原来的1/2或1/3.

3.分离度和方法建立

HPLC方法的建立：选择合适的分离条件，以便为一个给定的样品提供可靠的分离结果。

当需要分离多个色谱峰时，对于分离程度最差的一对色谱峰来说，分离度的最低要求是 Rs≥2，这样的色谱峰对称为决定性的色谱峰，分离度为决定性的分离度。

分离度 Rs=（1/4）[k/(1+k)](α-1)/N ^0.5

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