CRISPR是什么鬼？

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为啥叫CRISPR？因为古菌把这些外源的DNA片段，切完之后的短片段（short），整齐（regularly）地怼在一起（clustered），这些外源的短片段把回文（palindromic）重复（repeat）序列间隔（interspaced）开。为啥要有回文序列，呃，回文序列就是反向互补的，因为它需要转录后的RNA形成一个Stem loop（茎环结构），这样才能让RNA结合到Cas9上。

这几个凑在一起，就叫CRISPR序列……这段转录后呢，被称为是pre-crRNA。

在这一长段序列转录后，会出现主要的Cas9蛋白（我这里就只讲常用的CRISPR的II型了哈），前面转录出来tracrRNA，就是有一部分能和crRNA反向互补的RNA。在tracrRNA的帮助下，pre-crRNA被切成了小段的crRNA，然后就可以用了。

一旦噬菌体把一些不可名状的东西插入到古菌体内，然后把遗传物质DNA整到里面的时候。CRISPR就要行动了。

靶序列也不是没要求的，首先要有一段原间隔序列，其实就是和crRNA上外源序列同原的部分，然后在3`末端，需要有三个碱基的序列，这个序列叫PAM（不要在意是什么全名了），只要知道这个序列一般是NGG（有时候NAG也行，但是效果没那么好）就可以了，有这个PAM，靶序列才能打开。

crRNA和tracrRNA结合后，整合倒Cas9上，通过crRNA上的导引序列，把有外切酶活性的Cas9导引到了外源DNA上。Cas9通过PAM序列把靶序列轻轻打开，这时候，crRNA才能插入到里面，和靶序列进行灵与肉的交缠，啧啧啧，我都写不下去了……

接着通过Cas9的外切酶活性，把外源DNA给切断……

…华丽丽的分割线…

李莫愁博士：

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