南京工业大学Journal of Controlled Release：水蛭仿生微针递送水蛭素融合蛋...

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）。通过测量浊度与温度的关系，获得 cfE40H 、 cfE60H 和 cfE80H 的相变温度， 60 个重复单元的 ELP 可驱动融合蛋白在体温下自组装为高度有序的胶束。考虑到 cfE80H 可能因在体温下强烈聚集而堵塞血管，在后续研究中选择 60 个重复单元的 ELP 作为融合蛋白的融合伴侣。并通过凝血酶滴定实验测定 cfE60H 抗凝活性， HV 的 N 端修饰能够屏蔽其抗凝活性，当 cfE60H 与 FXa 孵育后， FXa 响应基序被切割后释放出 HV ，融合蛋白的抗凝活性逐渐恢复。全血孵育实验显示 cfE60H 具有较强的抗凝活性。

图 2. cfEHs 的体外特性分析。 A) 纯化后的 cfE40H 、 cfE60H 和 cfE80H 的 SDS-PAGE 分析。 B) 浓度为 20 μM 的 cfE40H 、 cfE60H 和 cfE80H 在 15 ℃和 37 ℃的照片。 C) 浓度为 20 μM 的 cfE40H 、 cfE60H 和 cfE80H 的浊度随时间变化。 D) cfE40H 和 cfE60H 在 15 ℃和 37 ℃的动态光散射（ DLS ）分析。 E) cfE40H 、 cfE60H 和 cfE80H 在 37 ℃的结构示意图。 F) cfE60H 和 cnE60H 的生物活性分析（ n=3 ）。 G) cfE60H 与 FXa 在 37 ℃孵育前后的透射电镜（ TEM ）图像，比例尺： 100 nm 。 H) 生理盐水、 HV 或 cfE60H 与全血孵育 2 小时的照片。

贴片的针尖由丝素蛋白（ SF ）和壳聚糖（ CS ）基质构成，基底由聚丙烯酸（ PAA ）制成。微针贴片的针为圆锥形，高度约 600 μm ，直径约 300 μm 。在 9×9 cm ² 的贴片上，微针呈 10×10 阵列分布（ 图 3 ）。微针贴片的针尖必须具备足够的机械强度以确保针尖能穿透皮肤到达真皮层，机械强度测试表明 cfEH/MN 贴片完全具备穿刺皮肤的能力。体外释放研究表明 cfEH 自组装成胶束可减少微针贴片中药物的突释现象，释放出的 cfEH 仍保持自组装能力和抗凝活性。储存稳定性实验显示，微针贴片在 4℃ 和 25℃ 干燥条件下存放

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