单克隆抗体生产过程中的杂质去除技术之现状与展望

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连续使用，纯化效果与层析效果相当。

聚乙二醇（PEG）作为一种极性非离子沉淀剂，具有成本低的优势，但不具备选择性。PEG的聚合度和浓度通过空间排阻的作用影响沉淀蛋白的大小，但PEG去除分子量小于抗体的HCPs主要是疏水作用的结果。PEG的沉淀作用同样存在产品纯度与收率之间的矛盾。

双水相体系（ATPS）是一种非变性、非降解的沉淀技术。体系的组成决定了蛋白质在两相中的分布，目的蛋白与杂质蛋白在ATPS中分处两相。盐浓度、沉淀级数、两相所占体积比都影响产品收率。提高体系盐浓度可提高产品收率，但使用一步法在工艺放大过程中会缩短仪器的使用寿命并引起目标蛋白质的沉淀，使用两步法不但克服了一步法的缺陷，还可以整合下游纯化过程。

沉淀技术简单高效，应用过程中需要考虑各个参数对目的蛋白质纯度和收率的影响，并且在工艺放大过程中还需考虑温度和混合速度的影响。

亲和沉淀用于重组融合蛋白的纯化。由于添加了标签蛋白，高昂的成本使其目前难以应用于生产。相可逆弹性蛋白质（ELPs）标签受热发生相分离从而产生沉淀。复合物经酶处理使目的蛋白质脱去标签，再降低pH以达到分离目的。

絮凝技术

絮凝技术通过絮凝剂选择性絮凝目的蛋白质。根据絮凝剂所带电荷不同分为阳离子絮凝剂、阴离子絮凝剂、多离子絮凝剂。

阳离子絮凝剂通过与带负电荷的杂质蛋白质结合，形成不稳定絮状物。

阴离子絮凝剂通过静电作用、氢键、疏水作用等与蛋白质相互作用，通过调节pH、离子强度产生相分离。应用中应避免剧烈的作用，以避免蛋白质变性。

多离子絮凝剂应用最为广泛。

沉淀剂和絮凝剂使用中应评估其可能产生的细胞毒性。生物制品不同的给药途径产生不同的毒性，静脉注射可能引起溶血，皮下注射可能引起局部反应等。生产中应选用高效低残留的沉淀剂或絮凝剂，以在制品纯化的下游阶段通过吸附、过滤、离子交换等方法去除。

深层过滤技术

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