基因编辑技术CRISPR\/Cas9助攻内源性Promoter驱动CAR 治疗肿瘤

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▲ 图一：内源性TCR和CAR的结构示意图 （引自Fesnak AD等，Nature Reviews Cancer，2016）

带有CAR蛋白的T细胞就称为CAR-T细胞（chimeric antigen receptor T cell, CAR-T），是目前最热门的细胞免疫治疗肿瘤的前沿技术之一【2】。其主要特点就是结合了T细胞杀伤肿瘤细胞的优势和CAR特异性结合肿瘤细胞的特性来消灭肿瘤细胞，目前已经在肿瘤治疗方面取得了瞩目的成就。

CAR-T技术的研究和应用已经取得了长足的发展，积累了非常多的研究，在此且按下不表。

前人的研究

此处单说最近Memorial Sloan Kettering癌症研究中心的科学家在《自然》杂志上面报道了一种利用内源性启动子启动T细胞表达CAR来杀伤肿瘤的方法【3】。这一研究报道对CAR-T技术及其应用领域具有重要的价值。

为何？要评价这个研究有没有新意，有没有价值，且看看在此之前的其他研究就能够明了。

在此之前，科学家们是如何让CAR蛋白存在于T细胞表面的呢？以慢病毒（lentivirus）介导的CAR为例，如下 图二 所示。首先，科学家们通过DNA合成（DNA synthesis）技术合成能够在细胞中表达CAR蛋白的DNA序列；然后通过分子克隆技术（molecular cloning）将CAR的DNA序列装进一种称为质粒载体（plasmid vector）的更长的环状DNA中。

▲ 图二：慢病毒介导CAR在T细胞表面表达的示意图， pREV、pRRE以及pVSVG为辅助质粒（helper plasmid）

质粒载体有什么作用呢？大多数质粒的作用就是把装在多克隆位点的基因或DNA序列在细胞中表达（expression）成蛋白质。这里举例的这种质粒载体DNA是经过人工改造的，包含其他的DNA组件比如表达抗生素的基因序列、启动子序列、多克隆位点（multiple cloning site, MCS）等等，并且，其可以和其他一些经过基因工程改造的辅助质粒（helper plasmid）一起在工程细胞（比如293T细胞）中自动组装成有感染（infection）能力的慢病毒。这样的慢病毒就具有在细胞中表达CAR蛋白的作用。

因此，将这样的慢病毒加入培养T细胞的培养基中，其就能够感染T细胞，即进入T细胞，然后利用T细胞内的元素来表达CAR蛋白，这些CAR蛋白表达之后就锚定在T细胞的表面（上面的

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