正文
ROBIN
中还
运用了
ONT的
自适应采样
技术
,允许在测序运行期间对感兴趣区域进行选择性测序。
基于上述流程设计,
ROBIN
在单次检测中
便可
实现术中实时甲基组分类与
24
小时内综合分子分析。
图
1.
术中文库制备和测序工作流程
具体而言,
ROBIN
超快速肿瘤诊断流程包括
:在手术台直接采集患者肿瘤样本;使用
Qiagen
的
QiaAmp Fast DNA
组织试剂盒快速提取
DNA
;
DNA
剪切后,通过改良的
ONTDNA
超长片段测序试剂盒
V14
进行文库制备;然后
使用
PromethION
设备和
R10.4.1
流
通
池对文库进行测序
,
加载文库后
5
分钟
即启动
测序,最长
运行
24
小时
;通过
MinKnow
软件进行
实时碱基识别
,并
结合自适应靶向测序(
Readfish
工具),聚焦
3
,
487
个目标区域。
此外,
ROBIN
还
通过图形界面实时整合多模态数据
,
同步展示甲基化分类概率、
CNV
图谱
、
SNV
注释及融合基因信号,使病理学家可在测序过程中动态解读数据。
接下来,研究团队在
50
例前瞻性术中
病例
(含胶质母细胞瘤、少突胶质细胞瘤等)
及