Mol Cell丨多梳蛋白无序连接器调控相分离和细胞命运

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PHC3L ） ，构建了 mini-PhPHC3L 融合蛋白。 结果显示， 与野生型 mini-Ph 相比， mini-PhPHC3L 在较低蛋白质浓度下即可与 DNA 发生相分离，形成较小的聚集体。在低盐浓度下， mini-PhPHC3L 在无 DNA 存在的情况下即可形成较小的聚集体，表明 PHC3L 可以促进 DNA 非依赖性的相分离。这些结果与分子动力学模拟预测的结果一致，即 PHC3L 与 SAM 的相互作用比 PhL 更强，从而增强了相分离的倾向。

研究人员进行了 分子动力学模拟 ，结果 显示， PHC3L 与 SAM 的相互作用比 PhL 更广泛， PHC3L 的碱性残基与 SAM 上的酸性残基 （ D1516/D1517 和 D1533/D1534 ） 形成较强的相互作用。 PHC3L 连接器与 SAM 的相互作用导致连接器更紧凑，进而增强了相分离的倾向。此外，模拟还显示， 人类连接器 （ PHC2L 和 PHC3L ） 与自身连接器的相互作用比果蝇连接器更强，这与实验结果一致，即人类连接器形成的聚集体更大。

为了验证模拟结果，研究 人员 设计了一系列突变，将 SAM 表面上的酸性残基突变为其对应的基本残基，以创造与 PhL 相互作用的互补基团。这些突变增强了 PhL 与 SAM 之间的相 互作用，并使 PhL -SAM 聚集物的形成类似 PHC3L-SAM 。蛋白质沉降分析表明，这些突变导致了不均匀的聚合，与模拟结果一致。此外， mini- Ph ^SAMsurf 在存在 DNA 时与 mini-Ph 相同，但在无 DNA 时也能发生相分离，表明连接器 -SAM 相互作用增强了相分离。 此外，研究人员在 引入 SAM 聚合破坏突变 （ EH ） 后， mini-Ph ^PHC3L-EH 和 mini- Ph ^{SAMsurf -EH} 在存在 DNA 时仍然能够形成聚集体，表明连接器 -SAM 相互作用与 SAM 聚合独立。 FRAP 分析表明， PHC3L 和 SAMsurf 都降低了聚集体内部的蛋白质动态性，而 EH

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