正文
60
℃）中干燥，得柴胡低极性部位（出膏率约为
2.13%
）；石油醚萃取后剩余部分，加入等体积醋酸乙酯萃取，多次萃取至萃取液无色，回收醋酸乙酯，浓缩至浸膏，于真空干燥箱（
70
℃）中干燥，得柴胡中极性部位（出膏率约为
5.35%
）；萃取后剩余部位蒸干得到柴胡高极性部位（出膏率约为
8.11%
）。按照《中国药典》方法，以柴胡皂苷
a
和
d
为指标成分对柴胡不同提取部位进行质量控制，其中柴胡低极性部位柴胡皂苷
a
和
d
质量分数约为
13.0
、
14.3 μg/g
，柴胡醋酸酸乙酯部位约为
1.095 0
、
0.775 5 mg/g
，柴胡高极性部位约为
231.0
、
104.3μg/g
。
2.2
模型动物的复制与给药
2.2.1
戊四唑致慢性惊厥小鼠模型剂量筛选
采用单位概率回归法
[19]
，测定造模药物戊四唑的
95%
有效药物剂量（
ED
95
）。通过文献检索得到戊四唑致癫痫模型的常用剂量
32 mg/kg
[20-22]
，分别取
5
个浓度（
50
、
40
、
32
、
25.6
、
20.48 mg/kg
）梯度（
0.8
倍梯度浓度）的溶液进行戊四唑
ED
95
测定。
50
只小鼠进行剂量筛选，第
1
只小鼠
ip 40 mg/kg
，观察小鼠行为
10 min
：若发生
3
级以上行为则认定模型成功，下一只小鼠选用下一梯度浓度即
32 mg/kg
戊四唑造模；若未出现
3
级以上行为则认为造模失败，下一只小鼠选用上一梯度浓度即
50 mg/kg
戊四唑造模。依次连续进行实验，每只小鼠均进行
1
次剂量筛选实验。结果采用
Probit
回归模型进行统计分析，最终
ED
95
有效剂量则为本实验的造模剂量。
2.2.2
动物分组与给药
50
只小鼠一次与
ip 55.18 mg/kg
（最佳造模剂量）戊四唑造模，观察小鼠行为
10 min
，若发生
3
级以上行为则认定小鼠能成功复制戊四唑致痫模型。经过筛选得到造模成功小鼠
48
只，并随机分为
6
组（
n
＝
8
），包括对照组、模型组、柴胡低极性部位组、柴胡中极性部位组、柴胡高极性部位组、阳性药地西泮（
4 mg/kg
）组。对照组小鼠安置在一个安静的房间中，该房间
12 h
明暗循环，并随意提供食物和水。除对照组外，其他组小鼠每
2
天进行
1
次造模（给药
60 min
后，
1
次
ip
戊四唑）。各给药组根据前期预实验结果确定了柴胡各部位给药剂量均为
20g/kg
（按生药量计），对照组和模型组小鼠给予等体积药物溶剂。实验中药物均用含
0.1%
聚山梨酯
-80
水溶解，给药方式选择
ip
给药，剂量为
0.1 mL/10 g
体质量，每天
1
次，连续给药
12 d
。
2.2.3
柴胡不同部位对戊四唑致慢性惊厥小鼠的影响
每天记录各组小鼠体质量，利用活动仪记录小鼠的行为动作，连续记录
10 min
，记录小鼠阵发性痉挛潜伏期（即从
ip
戊四唑开始至相当于痫性分级
1
～
3
级发作的时间）、强直性惊厥潜伏期（即从
ip
戊四唑开始至相当于痫性分级
5
级发作的时间）、惊厥次数（
10 min
内小鼠发生痫性分级
3
～
5
级行为的次数）。
痫性发作分级：小鼠痫性发作分级采用
Racine
标准
[23]
，
0
级：无发作反应；
1
级：节律性口角、耳或面部肌肉抽动阵挛；
2
级：点头并伴随更严重的面部肌肉抽动阵挛；
3
级：出现前肢阵挛但不伴随直立；
4
级：前肢阵挛伴随直立；
5
级：全身强直阵挛发作而跌倒。
2.2.4
样本的收集
经
11 d
实验结束后，各组小鼠脱颈椎处死，置于冰上快速解剖取出肝脏与海马，并放入液氮猝灭，后置于
−80
℃
冰箱保存。
2.3
统计分析
采用
SPSS 17.0
统计软件进行分析。计量数据以
表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较方差齐性时用
LSD
方法分析，方差不齐时用
Dunnett’s
方法分析。
P
＜
0.05
表示差异有统计学意义。
2.4
柴胡有效部位化学成分分析
2.4.1
色谱条件
采用
WatersAcquityuplc HSS T3
色谱柱（
100 mm
×
2.1 mm
，
1.7 μm
），流动相为
0.1%
甲酸
-
水（
A
）和甲醇（
B
）；梯度洗脱：
0
～
2 min
，
30%
～
40% B
；
2
～
10 min
，
40%
～
50% B
；
10
～
20 min
，
50%
～
55% B
；
20
～
30 min
，
55%
～
65% B
；
30
～
40 min
，
65%
～
75% B
；
40
～
50 min
，
75%
～
95% B
；
50
～
55 min
，
95% B
。进样量
5 μL
，体积流量
0.2mL/min
，柱温
40
℃
。
2.4.2
质谱条件
采用电喷雾离子源（
ESI
），同时进行正、负离子模式采集，扫描范围为
m
/
z
100
～
1500
；喷雾电压
3.5 kV
（
ESI
+
）和
−2.5 kV
（
ESI
−
）；毛细管温度为
320
℃
；加热器温度为
300
℃
；鞘气体积流量
35 arb
，辅助气体积流量
10 arb
；分辨率设定为
MS full scan 35 000 FWHM
以及
MS/MS 17 500 FWHM
，
碰撞能量
设定为
12.5
、
25
和
37.5 eV
。
2.4.3
化学成分检测与鉴定
取柴胡高极性部位
0.5 g
，加入
5 mL
蒸馏水超声溶解，
12 000 r/min
离心
10 min
，上清液用
0.22 μm
微孔滤膜滤过，即得柴胡高极性部位供试品溶液。取该供试品溶液进行检测，采集
LC-MS
色谱图，观察各色谱峰对应质谱图中的准分子离子峰及多级碎片等信息，通过与对照品比对、检索文献及相关的数据库进行成分鉴定指认，检测成分用于后续整合药理学分析。
2.5
整合药理学方法
2.5.1
癫痫疾病的候选靶标来源
整合药理学平台疾病
/
症状靶标数据库通过整合
Drugbank
数据库（
https://go.drugbank.com/
）、
OnlineMendelian Inheritance in Man
数据库（
OMIM
，
https://omim.org/
）、
Human Phenotype Ontology
数据库（
HPO
，
https://hpo.jax.org/
）、
Therapeutic Target Database
（
TTD
，
http://db.idrblab.net/ttd/
）、京都基因和基因组百科全书数据库（
