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转录因子调控靶基因的论证逻辑和方法总结

小张聊科研  · 公众号  · 科研  · 2025-05-28 19:29

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ENCODE https://www.encodeproject.org 数据里基于 ChIP-seq TF-DNA 结合数据 查找实验支持的 TF- 靶基因关系 ,不过这两个数据可能需要一些相关基础知识。随后在 敲低 A 的表达进行测序分析 将其中显著下调的基因列表与网站预测的基因列表进行交集处理,再结合表型机制调研和交集基因的背景调研,选择较为新颖的基因作为靶蛋白进行后续研究 ,如果没有测序数据只能 依赖于背景调研然后后续进行验证选择 。另一个比较直接的方法是进行 染色质免疫沉淀测序( ChIP-seq ,直接检测转录因子在基因组上的结合位点 ,但 ChIP-seq 得到的也是一系列可能的基因,最终还是要结合转录组测序数据选择可能性更大的靶基因,从性价比上来说利用网站更划算,不过 ChIP-seq 数据更可靠,毕竟网站上没有的实际上可能存在。

2 、从靶基因筛选转录因子

一般对于靶基因的研究有两个方向,一是 上游机制即靶基因为什么升高 ,二是下游机制即 靶蛋白的表达为什么会影响表型 ,通常对于高分期刊来说两方面都是需要研究的。前者就需要我们根据靶基因筛选转录调控因子。目前寻找转录因子最常用的方法还是 数据库查找 ,上面说的数据库 hTFtarget TRRUST 也可以查询调控靶基因的转录因子,比较麻烦但更全面的方法是使用上述中的 JASPAR motif + FIMO ,基于位置频率矩阵扫描目标基因启动子序列,比如富集到 E2F1 NF- κ B motifs ,提示它们可能是调控该基因集的 TF ,或者使用 ChEA3 在已有 TF gene 数据库中找哪些 TF 的靶基因显著富集在你的靶基因列表中。 利用 qPCR WB







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