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田蓟苷抗脑缺血再灌注程序性坏死的作用及机制研究

中草药杂志社  · 公众号  · 药品  · 2021-04-19 09:19

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,质量分数≥ 98% )由新疆 维吾尔 自治区药物研究所自制;胎牛血清(批号 10099-141C )、无糖培养基(批号 119660225 )购自美国 Gibco 公司; 0.25% 胰酶(批号 SH3004201 )、 DMEM 高糖培养基(批号 SH30022.01 )购自美国 Hyclone 公司;厌氧袋(批号 C-1 )购自日本三菱公司; Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK (批号 s702304 )购自美国 Selleckchem 公司; CCK-8 试剂盒(批号 AR1160-500 )、磷酸酶抑制剂(批号 AR1183 )购自武汉博士德生物工程有限公司;乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase LDH )细胞毒性检测试剂盒(批号 C0016 )、 SDS-PAGE 凝胶快速配制试剂盒(批号 P0012AC )购自上海碧云天生物技术有限公司; BCA 蛋白定量试剂盒(批号 23227 )购自美国 Pierce 公司; DCFH-DA 活性氧荧光探针(批号 CA1410 )、 RIPA 裂解液(批号 R0010 )、蛋白酶抑制剂 PMSF (批号 P0100 )、白细胞介素 -1β interleukin-1β IL-1β )试剂盒(批号 SEKH-0002 )、 IL-6 试剂盒(批号 SEKH-0047 )和肿瘤坏死因子 tumor necrosis factor-α TNF-α )试剂盒(批号 SEKH-0013 )、线粒体膜电位试剂盒(批号 M8650 )购自北京索莱宝生化试剂有限公司; mPTP 检测试剂盒(批号 BB-48122 )购自上海贝博生物科技有限公司;蛋白 marker (批号 26616 )购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司; RIPK3 抗体( ab62344 )、 MLKL 抗体(批号 ab255747 )、 CaMK 抗体(批号 ab22609 )、磷酸化 CaMK p-CaMK )抗体(批号 ab182647 )、磷酸甘油酸变位酶 5 phosphoglycerate mutase family 5 PGAM5 )抗体(批号 ab126534 )购自英国 Abcam 公司;磷酸化 MLKL p-MLKL )抗体(批号 91689 )购自美国 CST 公司;甘油醛 -3- 磷酸脱氢酶( glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase GAPDH )抗体(批号 TA-08 )、 IgG/ 辣根酶标记山羊抗小鼠抗体(批号 ZB-2305 )、 IgG/ 辣根酶标记山羊抗兔抗体(批号 ZB-2301 )购自北京中杉金桥生物技术有限公司; ECL 发光液(批号 WBKLS0500 )购自美国 Millipore 公司。

1.3 仪器

HERA cell-150i 细胞培养箱(美国 Thermo Fisher Scientific 公司); SPARK 多功能微孔板检测仪(瑞士 Tecan 公司); FUSION FX6 多功能成像系统购自(法国 Vilber 公司);电泳仪(美国 Bio-Rad 公司); TGL-16K 离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司);荧光显微镜(美国 invitrogen 公司)。
2 方法
2.1 药物配制

田蓟苷和 Z-VAD-FMK 分别溶于 DMSO ,配制成质量浓度为 10 mg/mL 的母液。

2.2 细胞培养

SH-SY5Y 细胞用含 10% 胎牛血清的 DMEM 高糖培养基于






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