正文
,质量分数≥
98%
)由新疆
维吾尔
自治区药物研究所自制;胎牛血清(批号
10099-141C
)、无糖培养基(批号
119660225
)购自美国
Gibco
公司;
0.25%
胰酶(批号
SH3004201
)、
DMEM
高糖培养基(批号
SH30022.01
)购自美国
Hyclone
公司;厌氧袋(批号
C-1
)购自日本三菱公司;
Caspase
抑制剂
Z-VAD-FMK
(批号
s702304
)购自美国
Selleckchem
公司;
CCK-8
试剂盒(批号
AR1160-500
)、磷酸酶抑制剂(批号
AR1183
)购自武汉博士德生物工程有限公司;乳酸脱氢酶(
lactate dehydrogenase
,
LDH
)细胞毒性检测试剂盒(批号
C0016
)、
SDS-PAGE
凝胶快速配制试剂盒(批号
P0012AC
)购自上海碧云天生物技术有限公司;
BCA
蛋白定量试剂盒(批号
23227
)购自美国
Pierce
公司;
DCFH-DA
活性氧荧光探针(批号
CA1410
)、
RIPA
裂解液(批号
R0010
)、蛋白酶抑制剂
PMSF
(批号
P0100
)、白细胞介素
-1β
(
interleukin-1β
,
IL-1β
)试剂盒(批号
SEKH-0002
)、
IL-6
试剂盒(批号
SEKH-0047
)和肿瘤坏死因子
-α
(
tumor necrosis factor-α
,
TNF-α
)试剂盒(批号
SEKH-0013
)、线粒体膜电位试剂盒(批号
M8650
)购自北京索莱宝生化试剂有限公司;
mPTP
检测试剂盒(批号
BB-48122
)购自上海贝博生物科技有限公司;蛋白
marker
(批号
26616
)购自美国
Thermo Fisher Scientific
公司;
RIPK3
抗体(
ab62344
)、
MLKL
抗体(批号
ab255747
)、
CaMK
Ⅱ
抗体(批号
ab22609
)、磷酸化
CaMK
Ⅱ
(
p-CaMK
Ⅱ
)抗体(批号
ab182647
)、磷酸甘油酸变位酶
5
(
phosphoglycerate mutase family 5
,
PGAM5
)抗体(批号
ab126534
)购自英国
Abcam
公司;磷酸化
MLKL
(
p-MLKL
)抗体(批号
91689
)购自美国
CST
公司;甘油醛
-3-
磷酸脱氢酶(
glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase
,
GAPDH
)抗体(批号
TA-08
)、
IgG/
辣根酶标记山羊抗小鼠抗体(批号
ZB-2305
)、
IgG/
辣根酶标记山羊抗兔抗体(批号
ZB-2301
)购自北京中杉金桥生物技术有限公司;
ECL
发光液(批号
WBKLS0500
)购自美国
Millipore
公司。
1.3
仪器
HERA cell-150i
细胞培养箱(美国
Thermo Fisher Scientific
公司);
SPARK
多功能微孔板检测仪(瑞士
Tecan
公司);
FUSION FX6
多功能成像系统购自(法国
Vilber
公司);电泳仪(美国
Bio-Rad
公司);
TGL-16K
离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司);荧光显微镜(美国
invitrogen
公司)。
田蓟苷和
Z-VAD-FMK
分别溶于
DMSO
,配制成质量浓度为
10 mg/mL
的母液。
2.2
细胞培养
SH-SY5Y
细胞用含
10%
胎牛血清的
DMEM
高糖培养基于