如何从细胞中提取高质量RNA

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1. 若是组织中提取，按照每50-100mg样品加入1ml Trizol的比例加入Trizol，而后匀浆破碎样品。细胞破碎后在室温下静置5分钟，这样可以分离出核蛋白复合物（nucleoprotein complexes），然后离心去除细胞碎片[2]。

2. 若是培养瓶中贴壁细胞，则先用冰PBS洗2次，而后按每10平方厘米区域加入1ml Trizol的比例加入Trizol, 吹打混匀处理。

3. 若是悬浮细胞，离心收集细胞，去除培养基，然后加入适量Trizol吹打混匀处理。

可以发现这步操作主要用到了Trizol这个试剂。那么Trizol的作用是什么呢？Trizol的主要成分是苯酚，是有效的蛋白变性剂。它能够抑制酶活性包括RNAaes，这样可以保证RNA不会被降解掉，同时Trizol能够使细胞裂解。

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抽提RNA

向EP管中的细胞液加入200ul氯仿，涡旋15秒后，室温静置3分钟，然后4℃，12000rpm,15min条件下离心。离心后分3层，上层为无色或淡粉色含有RNA，中层为白色含有DNA，下层为红色含有蛋白质和脂质。我们所需的RNA由于氯仿的作用就分在上层的水相中，如下图所示：

氯仿是有机溶剂，添加氯仿会使细胞内的蛋白变性沉淀，可以通过离心进行去除。同时加入氯仿后，水相和有机相会分层，将水相中的酚抽提以免损伤核酸，另外还能溶解一些脂溶性杂质纯化RNA。

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