正文
1
仪器与试药
1.1
仪器
Agilent 1260 infinity
型高效液相色谱仪，配备
G1315D
型
DAD
检测器，美国安捷伦科技有限公司；
RE-2000A
旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；
TG16-WS
台式离心机，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；
FA1104N
十万分之一电子分析天平，上海精密科学仪器有限公司；超纯水仪，美国
Millipore
公司。
1.2
试药
黄芪（批号
190702
）、红花（批号
200313
），浙江中医药大学中药饮片有限公司，经浙江中医药大学药学院黄绳武教授鉴定，黄芪为豆科黄芪属植物膜荚黄芪
Astragalus membranaceus
(Fisch.) Bge.
的干燥根，红花为菊科红花属植物红花
Carthamus tinctorius
L.
的干燥花。饮片经粉碎后得黄芪、红花粉末。对照品毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷，批号分别为
SZ20180608MRYHTG
、
SZ20180324MBHG
、
SZ20180425MRYHT
、
SZ20180506HQJG
，南京世洲生物科技有限公司；对照品羟基红花黄色素
A
、紫丁香苷、山柰酚
-3-
O
-
芸香糖苷，批号分别为
19100931
、
19111241
、
19110643
，上海同田生物技术股份有限公司；对照品脱水红花黄色素
B
，实验室自制；以上对照品质量分数均大于
98%
。甲醇、乙腈，色谱级，美国天地公司；三氟乙酸，上海麦克林生化科技有限公司，批号
C11196166
。
2
方法与结果
2.1
含量测定方法
黄芪
-
红花药对水提液的成分含量通过
HPLC- DAD
法进行测定，色谱条件为
Alltech Alltima C
18
色谱柱（
250 mm
×
4.6 mm
，
5 μm
）及
Alltech Alltima C
18
保护柱（
12.5 mm
×
4.6 mm
）；流动相为
0.01%
三氟乙酸
-
乙腈，梯度洗脱：
0
～
7 min
，
12%
乙腈；
7
～
8 min
，
12%
～
18%
乙腈；
8
～
22 min
，
18%
～
20%
乙腈；
22
～
27 min
，
20%
～
21%
乙腈；
27
～
29 min
，
21%
～
26%
乙腈；
29
～
35 min
，
26%
～
32%
乙腈；
35
～
58 min
，
32%
乙腈；柱温
30
℃；体积流量
1.0 mL/min
；检测波长：
210 nm
（毛蕊异黄酮苷、黄芪甲苷）、
260 nm
（紫丁香苷、山柰酚
-3-
O
-
芸香糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮）、
403 nm
（羟基红花黄色素
A
、脱水红花黄色素
B
）；进样量
20 μL
。
按出峰时间先后顺序各成分的含量分别表示为
羟基红花黄色素
A
（
t
R
＝
6.90 min
）、紫丁香苷（
t
R
＝
9.47 min
）、毛蕊异黄酮苷（
t
R
＝
19.66 min
）、脱水红花黄色素
B
（
t
R
＝
22.16 min
）、山柰酚
-3-
O
-
芸香糖苷（
t
R
＝
26.90 min
）、芒柄花苷（
t
R
＝
35.29 min
）、毛蕊异黄酮（
t
R
＝
40.48 min
）、黄芪甲苷（
t
R
＝
57.52 min
），经前期方法学考察，
8
种待测成分的质量浓度与峰面积均呈现良好的线性关系（
r
≥
0.999 7
），精密度、稳定性和重复性均良好，
RSD
值均小于
3%
，平均加样回收率在
96.26%
～
101.31%
，
RSD
为
0.74%
～
2.79%
。
2.2
单因素考察
2.2.1
指标权重及综合得分的计算
在单因素考察过程中发现，黄芪
-
红花药对水提液中
8
种有效成分的含量随着因素水平变化趋势并不一致，给后续试验选取合适的因素水平造成一定困难。因此本实验通过熵权法确定黄芪
-
红花药对水提液中的
8
种成分在
5
个提取影响因素下含量的权重系数（
w
j
），计算最终的综合评分（
S
i
），以此直观衡量黄芪
-
红花药对水提液中不同成分受各因素变化的影响
[8]
。具体计算过程如下。
（
1
）
指标的标准化处理：由于黄芪
-
红花药对水提液中的
8
种成分均对治疗心脑血管疾病有一定疗效，但各成分含量差异较大，不宜直接计算指标权重，故均进行标准化处理。其中
x
ij
为第
i
个样品中第
j
个指标成分的含量（
i
＝
1
，
2
，
…
，
n
；
j
＝
1
，
2
，
…
，
8
）；而
x
ij
′
为正向化处理后数据，为方便表达，仍将其记为
x
ij
。
x
ij
′
＝
{
x
ij
－
min{
x
1
j
，
…
，
x
nj
}}/{max{
x
1
j
，
…
，
x
nj
}
