正文
A. sinomontanum
Nakai
的干燥根，具体编号及来源见表
1
。
LDZX-30FA
立式压力蒸汽灭菌器，上海申安医疗器械厂；
BT125D
型电子天平，赛多利斯科学仪器有限公司；
KQ3200DB
型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；
FW-400A
型高建万能粉碎机，北京科伟永兴仪器有限公司；
HHS-11S
型数显恒温水浴锅，上海宜昌仪器纱筛厂；
1100 Series
型高效液相色谱仪，美国
Agilent
科技有限公司，含
DAD
检测器；
SHB-3
型循环水多用真空泵，郑州杜甫仪器厂；
Buchi R-200
旋转蒸发仪，瑞士
Buchi
实验室仪器公司。
高乌甲素对照品，甘肃神龙药业股份有限公司，批号
20001001
，质量分数≥
98%
；冉乌头碱对照品，成都克洛玛生物科技有限公司，批号
150404
，质量分数≥
98%
；乙腈、甲醇、三乙胺、磷酸二氢钠，色谱纯，天津大茂化学试剂厂；石油醚、乙醇，分析纯，天津大茂化学试剂厂；西沙比利胶囊，山东淄博新达制药有限公司，批号
180706
，规格
5 mg
。
昆明种小鼠，
SPF
级，体质量（
20
±
2
）
g
，雌雄各半，由中国农业科学研究院兰州兽医研究所实验动物中心提供，实验动物生产许可证号
SCXK
（甘）
2015-0001
。饲养条件：甘肃中医药大学中药药理实验室，环境温度（
23
±
2
）℃，相对湿度
50%
～
60%
。动物实验经甘肃中医药大学动物实验伦理委员会批准，批准文号
SYXK
（甘）
2015-0002
。
2
方法与结果
2.1
生
、
制高乌头饮片的制备
高乌头药材净制润软后，切制约为
5 mm
的片段，自然干燥，即得高乌头生品饮片。生品饮片用
10%
的甘草汁（
3 mL
含
1 g
甘草）润透后，置立式压力蒸汽灭菌器内，温度
127
℃，压力
0.5 MPa
条件下蒸制
5 h
，取出晾干，即得高乌头炮制品饮片
[10]
。
2.2
生
、
制高乌头石油醚部位的制备
分别取生、制高乌头饮片，加入
10
倍量
95%
乙醇冷浸
24 h
后超声提取，超声（功率
300W
、频率
40 kHz
）
45 min
，冷浸超声提取
2
次，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，即得高乌头醇提物。所得稠膏继续加水制成混悬液，用石油醚萃取
4
次，每次
200 mL
，
35
℃以下减压回收石油醚，即得生、制高乌头石油醚部位
[11-12]
。
2.3
溶液的制备
2.3.1
供试品溶液制备
分别取“
2.2
”项生、制高乌头石油醚部位浸膏
0.5 g
，精密称定，加甲醇溶解，定容至
10 mL
，密塞，摇匀，进样前用
0.45 μm
微孔膜滤过，即得。
2.3.2
对照品溶液制备
分别精密称定高乌甲素、冉乌头碱对照品
8.01
、
2.96 mg
，置于
10 mL
量瓶中，加甲醇至刻度线，即得高乌甲素与冉乌头碱混合对照品溶液（含高乌甲素
0.801mg/mL
、冉乌头碱
0.296 mg/mL
）。
2.4
色谱条件
采用
Dikmaspursil C
18
色谱柱（
250 mm
×
4.6 mm
，
5 μm
），流动相为
0.05 mol/L
磷酸二氢钠水溶液
-
乙腈，梯度洗脱，洗脱条件见表
2
，进样量
10 μL
，柱温
35
℃，检测波长
235
、
254
、
280
、
290
、
308 nm
[13-14]
。
2.5 HPLC-DAD
指纹图谱的建立
2.5.1
精密度试验
取适量高乌头石油醚部位浸膏（
S1
），按“
2.3.1
”项下方法制备供试品溶液，按“
2.4
”项下色谱条件进样分析，连续进样
6
次，将所得色谱图数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（
2012
版）”，得到各图谱的相似度均大于
0.96
，计算
45
个主要共有峰相对保留时间
RSD
＜
2%
，峰面积
RSD
＜
2%
，表明此方法精密度较好。
2.5.2
稳定性试验
取适量高乌头石油醚部位浸膏（
S1
），按“
2.3.1
”项下方法制备供试品溶液，分别在
0
、
2
、
4
、
8
、
12
、
24 h
，按“
2.4
”项下色谱条件进行测定，将所得色谱图数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（
2012
版）”，得到各图谱的相似度均大于
0.94
，计算
45
个主要共有峰相对保留时间
RSD
＜
2%
，峰面积
RSD
＜
2%
，表明供试品溶液在
24 h
内稳定。
2.5.3
重复性试验
取适量高乌头石油醚部位浸膏（
S1
），按“
2.3.1
”项下方法平行制得
