哺乳动物细胞瞬时基因表达的优化策略大揭秘

抗体圈 · 公众号 · · 2025-05-06 14:56

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：HEK293 和 CHO 细胞是 TGE 系统中最常用的宿主细胞。CHO 细胞有多种亚型，如 CHO-S、CHO DXB11 等；HEK293 细胞也有不同类型，如 293E、293T 和 293F 细胞。HEK293 细胞因其易于基因操作、能在悬浮培养中达到高细胞密度且适应无血清培养条件，成为 TGE 系统的首选宿主，但它也存在一些局限性，比如蛋白质产物的 N - 糖基化结构不同、临床应用经验不足以及易受人类病毒污染等。

表达载体 ：表达载体包含启动子、增强子、终止子和选择标记等调控元件，这些元件的不同组合会对重组蛋白的表达产生不同影响。例如，在 CHO 细胞中，表达 Epstein-Barr 病毒核抗原 - 1（EBNA-1）蛋白或大 T 抗原的细胞系，其 TGE 水平更高。

培养基 ：细胞培养基是重组蛋白高效表达的基础，无血清培养基（SFM）能消除血清带来的批次差异、支原体污染以及复杂蛋白成分等问题，简化下游分离纯化过程，降低生产成本。

三、提高瞬时基因表达的策略

提高 TGE 的策略涵盖多个方面（ 原文 Fig. 2，展示提高哺乳动物细胞瞬时表达的策略，使读者对这些策略有整体的认识 ）。

1.细胞系改造 ：通过对细胞系进行改造，可以提高重组蛋白的产量。比如，Macaraeg 等人敲除 CHO-K1 细胞中的 Bax 和 Bak 这两个促凋亡基因，构建出的双敲除（DKO）细胞表达的抗体效价相比对照组提高了 3 - 4 倍。还有研究构建的过表达 BclxL 的细胞系，在分批培养 14 天后，融合蛋白产量提高了 70 - 270%，细胞活力保持在 90% 以上，凋亡减少。Expi293F 细胞系在悬浮培养中具有高密度生长、易于转染和高效表达等优势；在 HEK293T 表达系统中，人 17β- 羟基类固醇脱氢酶 1 能实现高水平表达（原文 Table 1，展示优化哺乳动物细胞中重组蛋白瞬时表达的策略，详细列出不同策略下细胞系、细胞活力、产量等变化，让读者清晰了解各项优化策略的效果）。