正文
是在已知抗体或抗原标记上易显示的物质,通过检测标记物来反映抗原抗体反应的情况,从而间接地测出被检抗原或抗体的存在与否或量的多少的一种生物技术。常用的标记物有荧光素、酶、放射性核素及胶体金等。免疫标记技术具有快速、定性或定量甚至定位的特点,是目前应用最广泛的免疫学检测技术。
一个试剂盒所包含的技术原理,从方法学的角度可以分解成3-4个部分:
抗原抗体反应模式、分离模式、信号放大模式
(有的试剂盒没有这一部分)、
信号检测模式
。
抗原抗体反应模式
:即特异性反应的反应特征,不同试剂盒具体选择哪种免疫反应模式,一般取决于被检测标志物的类别(抗原或是抗体)及其分子大小。例如,我们常说的间接法、双抗体夹心法、双抗原夹心法、竞争法等等,就是以此为依据。当然,此部分特征的表述对于一些非免疫反应的生化试剂也是成立的,试剂中有效成分与被检标志物发生特征性反应。核酸试剂亦是如此。
分离模式
:即采取一定的方法保证特异性结合的分析物被保留,而未结合和无用的的反应物被清除。以双抗体夹心法ELISA试剂为例,第一次样本孵育和第二次加酶标记抗体孵育后的2次洗涤,均是为了让已经特异性集合的抗原抗体复合物与液相中未参与反应的抗体分离,确保最终酶催化显色底物的量与样本中标志物的量成比例。常用的分类方法有96孔板(ELISA使用的是透明的96孔板,板式发光使用的是白色或黑色的96孔板等)、磁颗粒/磁珠、纤维素膜(免疫层析)以及新兴的微流控芯片技术等等。
信号放大模式
:主要是指应用生物素-亲和素/链霉素放大系统的检测试剂。当然,一些试剂中利用的酶促底物反应亦具有放大作用。
(酶促底物反应)
(生物素-亲和素 ——1)
(生物素-亲和素 ——2)
信号检测模式
:微量的抗原抗体反应,人的肉眼是无法直接看到,我们通过一定的标记技术,将微观的抗原抗体反应数量关系转化成分析化学中常用的检测方法,如光学检测、放射强度检测等。常用的标记物有荧光素、酶(与酶促发光/显色底物联用)、放射性同位素、胶体金等。试剂盒命名时括号中的方法学名称有很多就是依据这一部分而确定的,例如酶联免疫法、化学发光法、胶体金法、免疫透射比浊法等等。
(电化学发光检测原理)
(生物传感器基本原理)
(微流控芯片检测原理 a)
(微流控芯片检测原理 b)