UMI-RNAseq—转录组绝对定量

正文

请到「今天看啥」查看全文

• 利用真核生物大部分mRNA都带有polyA尾的结构特征，通过Oligo(dT)磁珠富集带有polyA尾的mRNA;
• 加入片段化试剂（Fragmentation Buffer)将mRNA 随机打断成短片段；
• 以短片段为模板逆转录合成cDNA,之后进行cDNA末端修复、加A尾、并连接UMI标签和测序接头； 【 关键点：UMI 在这一步被引入，每个cDNA分子理论上会连接上一个带有独特UMI序列的接头。 】
• 最后进行PCR扩增并获得文库； 【最终的测序文库分子结构（从5'到3'端看其中一条链）大致为： P5 - Rd1 SP - UMI - cDNA insert - Rd2 SP - index - P7 。】
• 文库质检合格后采用illumina平台进行测序，测长通常为PE150。

UMI-RNAseq 分析流程

定量流程

首先是确定测序数据的文库信息，比如示例用到的文库是：

请到「今天看啥」查看全文