细胞活力检测—方法学大盘点！

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BrdU结构长的跟胸腺嘧啶核苷（Thymine）很像，当细胞生长通过增殖周期-S期（DNA半保留复制期）时，BrdU可鱼目混珠进入新合成的DNA中。

因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞都会带有含BrdU的DNA，可通过抗BrdU单克隆抗体检测，统计S期细胞百分数并计算细胞倍增时间。

但BrdU单克隆抗体太大，无法直接与DNA双股螺旋上的BrdU结合，所以实验过程需要将DNA部份变性，使双股部份解开成单股才能顺利检测。

2）EdU检测法

EdU原理跟BrdU检测法很像，都是代替胸腺嘧啶渗入正在复制的DNA中。

但能与EdU共轭反应的染料分子仅为BrdU抗体的1/500，在细胞内更容易扩散，所以不需要变性处理，有效缩减实验操作时间，更能避免样品损伤，反应更真实的细胞增殖状况。

3、增殖检测法—CFSE检测法

CFSE是一种可穿透细胞膜的荧光染料，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进入细胞；当CFSE扩散穿过细胞膜，会与细胞内酯酶产生水解反应而发出绿色荧光，这些带荧光的CFSE会进一步与细胞骨架蛋白结合，形成稳定的胞内荧光蛋白。

每当细胞进行分裂增殖，胞内荧光蛋白会被平均分配到下一代细胞中，因此细胞荧光强度会随着增殖代数增加而不断的降低，可用流式细胞仪进一步侦测分析得出细胞分裂增殖的情况。

4、增殖蛋白检测

与休眠或衰老细胞相比，分裂细胞具有较高的细胞周期蛋白表达，因此可检测细胞周期特异性蛋白水平，作为细胞增殖的读数。

一些常见的增殖蛋白包括增殖细胞核抗原 (PCNA)、KI67和磷酸化组蛋白 H3，可使用蛋白质印迹法 (WB)、IF、IHC、流式细胞术和ELISA进行检测。

免疫组织化学 (IHC) 检测细胞活力：

免疫组织化学 (IHC) 是使用抗体检测表达特异性抗原的组织样本中的细胞群体。

庄主推荐： 免疫组化（IHC）

这种方法通常用于鉴定发育过程中蛋白质的时间分布，分析疾病组织相比于健康组织中的蛋白质表达模式，以及基于生物标志物表达区分各种细胞类型。

IHC还可通过分析组织样本来测量背景中的细胞存活。例如，可通过对量化表达增殖标志物（例如Ki67或PCNA）的细胞数量来评估细胞活力，这在确定治疗对肿瘤细胞增殖的影响时尤其具有相关性。

除了TUNEL检测外，还可以使用针对剪切型caspase-3和剪切型PARP的抗体来染色组织，从而鉴别凋亡细胞。

5、衰老表明增殖受损

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