正文
HOC-ZH45AF
型真空烘箱，上海恒黔电子科技有限公司；
881Y-1
型远红外恒温干燥箱，吴江市华银烘箱制造厂；
DHG-9076A
型电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司；
ZD-F12
型真空冷冻干燥机，南京载智自动化设备有限公司；
HP-C220
型精密色差仪，上海图新电子科技有限公司；
KQ-500DV
型超声清洗仪，昆山市超声仪器有限公司。
1.2
材料
对照品菊苣酸（批号
PS000526
，质量分数＞
98%
）、绿原酸（批号
PS0131-0025
，质量分数＞
98.5%
），成都普思生物科技有限公司；乙腈、磷酸为色谱纯；水为超纯水；甲醇为分析纯。新鲜菊苣采自河南封丘豫封园百草有机家庭农场，经河南中医药大学张振凌教授鉴定为菊科菊苣属植物菊苣
C. intybus
L.
的新鲜叶。
2
方法与结果
2.1
干燥方法考察
取新鲜菊苣叶，洗净后切
10mm
段，晾干表面水分，备用。将样品按照阴干、晒干、冷冻干燥、定温鼓风干燥、连续升温鼓风干燥、真空干燥、远红外干燥
7
种不同方式干燥，放置备用。按照《中国药典》
2020
年版菊苣项下浸出物测定法
[9]
测定浸出物含量，测定菊苣酸、绿原酸含量，考察不同干燥方法对菊苣酸、绿原酸、浸出物含量的影响。
2.2
菊苣酸
、
绿原酸的含量测定
2.2.1
色谱条件
色谱柱为
Agilent Zorbax Eclipse XDB-C
18
分析型色谱柱柱（
250 mm
×
4.6 mm
，
5 μm
）；流动相为乙腈
-0.4%
磷酸水溶液，洗脱梯度：
0
～
25 min
，
10%
～
21%
乙腈；
25
～
40 min
，
21%
乙腈；
40
～
45 min
，
21%
～
10%
乙腈；体积流量
1 mL/min
；柱温
30
℃；进样量
20 μL
；检测波长
334 nm
。
HPLC
图见图
1
。
2.2.2
对照品溶液的制备
分别精密称取绿原酸、菊苣酸对照品
4.68
、
5.88 mg
置于
5 mL
量瓶中，超纯水定容至刻度，得质量浓度分别为绿原酸
0.936 mg/mL
、菊苣酸
1.176 mg/mL
的对照品母液。
2.2.3
供试品的制备
精密称取
0.5 g
的菊苣样品粉末（过
4
号筛）于
50 mL
具塞锥形瓶中，加入
25 mL
甲醇，密塞，超声提取
40 min
，放冷后补足减失的质量。滤过，取续滤液
10 mL
至蒸发皿中，
55
℃水浴锅上挥干甲醇，用超纯水溶解至
5 mL
量瓶中定容，即得供试品溶液。
2.2.4
线性关系考察
精密吸取“
2.2.2
”项下绿原酸、菊苣酸对照品母液适量，至
2 mL
量瓶中并定容，配制成质量浓度分别为绿原酸
0.467 5
、
4.675
、
23.375
、
46.750
、
70.125
、
233.750 μg/mL
，菊苣酸
2.937 5
、
29.375
、
146.875
、
293.750
、
440.625
、
587.500 μg/mL
的混合对照品溶液，过
0.22 μm
的微孔滤膜，按照
“
2.2.1
”
项下色谱条件检测，以对照品溶液进样量为横坐标（
X
），对照品峰面积为纵坐标（
Y
），绘制标准曲线，标准曲线方程为绿原酸
Y
＝
2 279 751.892 4
X
－
1 004.939 5
，
R
²
＝
1.000 0
，线性范围为
9.35
～
4 675.0 ng
；菊苣酸
Y
＝
2 798 275.277 3
X
＋
162 685.388 8
，
R
²
＝
0.999 5
，线性范围为
58.75
～
11 750.0 ng
。
2.2.5
精密度试验
吸取编号为
S6
样品的供试品溶液
20 μL
，按照“
2.2.1
”项下色谱条件连续进样
6
次，计算绿原酸和菊苣酸峰面积
RSD
值分别为
0.17%
、
0.20%
，说明该方法精密度良好。
2.2.6
稳定性试验
取同一供试品溶液，在
0
、
2
、
4
、
6
、
8
、
10
、
12
、
24 h
进样测定，计算绿原酸、菊苣酸峰面积
RSD
值分别为
