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外泌体中γ-谷氨酰转移的酶活性可作为前列腺癌潜在的标记物

exosomes  · 公众号  · 医学  · 2017-05-24 23:51

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降解的第一步。与 LNCaP C4 细胞相比, Western 印迹分析显示从 C4-2 C4-2B 细胞分离的外泌体中 GGT1 的大、小亚基升高。


从四个细胞系分离的外泌体中检测到了作为外泌体标记物的PSMA以及 CD9 。与外泌体的表达增加一致,在 C4-2 C4-2B 细胞中, GGT1 大和小亚基均上调,而 4 个细胞系中 PSMA 表达水平也相似。这些结果证实,在去势抗性 C4-2 和骨转移 C4-2B 细胞系中,外泌体中的 GGT1 表达均增加。

通过免疫捕获从C4-2和 C4-2B 细胞分离的外来体中 GGT1 表达的上调

当通过使用抗CD9抗体的免疫捕获方法从细胞培养基中分离外泌体时, C4-2 C4-2B 细胞中 GGT1 大和小亚基的水平升高,而 PSMA 以及外泌体标记物 CD9 Alix 在细胞系之间没有显着差异。同样,通过抗 PSMA 抗体从 C4-2 C4-2B 细胞捕获的外泌体中 GGT1 的大小亚基上调。这些结果表明, CD9 PSMA 阳性外泌体的不同亚组表现出 GGT1 的表达均增加。

从PC细胞分离的外泌体中 GGT 活性与 GGT1 表达的相关性

我们使用荧光成像探针,通过用GGT切割谷氨酸激活的γ - 谷氨酰羟基甲基罗丹明绿( gGlu-HMRG )测量外泌体中 GGT 的活性。从 LNCaP C4 C4-2 C4-2B 细胞分离的细胞 裂解物和外泌体中测量GGT的活性。

LNCaP 细胞相比, C4-2B 细胞中 GGT 活性显着增加。另一方面,从 C4-2 C4-2B 细胞分离的外泌体的 GGT 活性高于来自 LNCaP C4 细胞。更重要的是,外泌体中 GGT 的活性与 4 个细胞系外泌体中 GGT1 大小亚基的表达水平相关。这些结果表明, GGT 活性可以用作替代外泌体 GGT 的表达。


由人体血清分离的外泌体中的GGT活性和 GGT1 表达

Franzini 等人在血清中鉴定出四种 GGT 级分:大 GGT ,中 GGT ,小 GGT 和游离 GGT 级分,最近表明大 GGT 部分对应于外泌体 GGT 。在这里,我们将健康个体的血清进行大小排阻层析( SEC ),并测量每个级分中的 GGT 活性和 CD9 表达。 通过夹心 ELISA 测定 CD9 的水平。 SEC 产生了 GGT 活性的的一个小峰和主峰( 4a )。跨越 4 9 级的小峰为 CD9 阳性,表明在血清外泌体中检测到 GGT







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