正文
降解的第一步。与
LNCaP
和
C4
细胞相比,
Western
印迹分析显示从
C4-2
和
C4-2B
细胞分离的外泌体中
GGT1
的大、小亚基升高。
从四个细胞系分离的外泌体中检测到了作为外泌体标记物的PSMA以及
CD9
。与外泌体的表达增加一致,在
C4-2
和
C4-2B
细胞中,
GGT1
大和小亚基均上调,而
4
个细胞系中
PSMA
表达水平也相似。这些结果证实,在去势抗性
C4-2
和骨转移
C4-2B
细胞系中,外泌体中的
GGT1
表达均增加。
通过免疫捕获从C4-2和
C4-2B
细胞分离的外来体中
GGT1
表达的上调
当通过使用抗CD9抗体的免疫捕获方法从细胞培养基中分离外泌体时,
C4-2
和
C4-2B
细胞中
GGT1
大和小亚基的水平升高,而
PSMA
以及外泌体标记物
CD9
和
Alix
在细胞系之间没有显着差异。同样,通过抗
PSMA
抗体从
C4-2
和
C4-2B
细胞捕获的外泌体中
GGT1
的大小亚基上调。这些结果表明,
CD9
或
PSMA
阳性外泌体的不同亚组表现出
GGT1
的表达均增加。
从PC细胞分离的外泌体中
GGT
活性与
GGT1
表达的相关性
我们使用荧光成像探针,通过用GGT切割谷氨酸激活的γ
-
谷氨酰羟基甲基罗丹明绿(
gGlu-HMRG
)测量外泌体中
GGT
的活性。从
LNCaP
,
C4
,
C4-2
和
C4-2B
细胞分离的细胞
裂解物和外泌体中测量GGT的活性。
与
LNCaP
细胞相比,
C4-2B
细胞中
GGT
活性显着增加。另一方面,从
C4-2
和
C4-2B
细胞分离的外泌体的
GGT
活性高于来自
LNCaP
和
C4
细胞。更重要的是,外泌体中
GGT
的活性与
4
个细胞系外泌体中
GGT1
大小亚基的表达水平相关。这些结果表明,
GGT
活性可以用作替代外泌体
GGT
的表达。
由人体血清分离的外泌体中的GGT活性和
GGT1
表达
Franzini
等人在血清中鉴定出四种
GGT
级分:大
GGT
,中
GGT
,小
GGT
和游离
GGT
级分,最近表明大
GGT
部分对应于外泌体
GGT
。在这里,我们将健康个体的血清进行大小排阻层析(
SEC
),并测量每个级分中的
GGT
活性和
CD9
表达。 通过夹心
ELISA
测定
CD9
的水平。
SEC
产生了
GGT
活性的的一个小峰和主峰(
图
4a
)。跨越
4
至
9
级的小峰为
CD9
阳性,表明在血清外泌体中检测到
GGT