外泌体中γ-谷氨酰转移的酶活性可作为前列腺癌潜在的标记物

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降解的第一步。与 LNCaP 和 C4 细胞相比， Western 印迹分析显示从 C4-2 和 C4-2B 细胞分离的外泌体中 GGT1 的大、小亚基升高。

从四个细胞系分离的外泌体中检测到了作为外泌体标记物的PSMA以及 CD9 。与外泌体的表达增加一致，在 C4-2 和 C4-2B 细胞中， GGT1 大和小亚基均上调，而 4 个细胞系中 PSMA 表达水平也相似。这些结果证实，在去势抗性 C4-2 和骨转移 C4-2B 细胞系中，外泌体中的 GGT1 表达均增加。

通过免疫捕获从C4-2和 C4-2B 细胞分离的外来体中 GGT1 表达的上调

当通过使用抗CD9抗体的免疫捕获方法从细胞培养基中分离外泌体时， C4-2 和 C4-2B 细胞中 GGT1 大和小亚基的水平升高，而 PSMA 以及外泌体标记物 CD9 和 Alix 在细胞系之间没有显着差异。同样，通过抗 PSMA 抗体从 C4-2 和 C4-2B 细胞捕获的外泌体中 GGT1 的大小亚基上调。这些结果表明， CD9 或 PSMA 阳性外泌体的不同亚组表现出 GGT1 的表达均增加。

从PC细胞分离的外泌体中 GGT 活性与 GGT1 表达的相关性

我们使用荧光成像探针，通过用GGT切割谷氨酸激活的γ - 谷氨酰羟基甲基罗丹明绿（ gGlu-HMRG ）测量外泌体中 GGT 的活性。从 LNCaP ， C4 ， C4-2 和 C4-2B 细胞分离的细胞 裂解物和外泌体中测量GGT的活性。

与 LNCaP 细胞相比， C4-2B 细胞中 GGT 活性显着增加。另一方面，从 C4-2 和 C4-2B 细胞分离的外泌体的 GGT 活性高于来自 LNCaP 和 C4 细胞。更重要的是，外泌体中 GGT 的活性与 4 个细胞系外泌体中 GGT1 大小亚基的表达水平相关。这些结果表明， GGT 活性可以用作替代外泌体 GGT 的表达。

由人体血清分离的外泌体中的GGT活性和 GGT1 表达

Franzini 等人在血清中鉴定出四种 GGT 级分：大 GGT ，中 GGT ，小 GGT 和游离 GGT 级分，最近表明大 GGT 部分对应于外泌体 GGT 。在这里，我们将健康个体的血清进行大小排阻层析（ SEC ），并测量每个级分中的 GGT 活性和 CD9 表达。 通过夹心 ELISA 测定 CD9 的水平。 SEC 产生了 GGT 活性的的一个小峰和主峰（ 图 4a ）。跨越 4 至 9 级的小峰为 CD9 阳性，表明在血清外泌体中检测到 GGT

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