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EVs和它们内容的miRNA抑制可细胞外信使促进COPD、哮喘疾病的进展，或者促进肺癌的形成。在2003年，Admyre 等人首次报导 EVs在肺泡灌洗液（BALs）中出现。在气道微环境中，不同的环境刺激因子（比如香烟烟雾）可以调节这些EV的释放和它们的 成分的改变（miRNA和蛋白）。比如，循环中存在的肺内皮细胞来源的EVs可能是香烟烟雾暴露后反应肺损伤和炎症的潜在的生物标记物。而且，吸烟者的血中更高水平的微粒子代表着早期的肺气肿。最近有报道，偶尔吸烟的 人（每月少于10支烟）短暂暴露于香烟与循环中潜在的促炎症微粒的释放有很大关系。吸烟似乎也会导致健康个体血浆中微粒内miRNA谱的改变；尤其miR-21（与癌症进展相关的miRNA），在暴露于香烟烟雾提取物的人类支气管上皮细胞释放的外泌体中升高。但是知道现在，也没有关于吸烟者肺泡灌洗液的EVs，它们的组成成分和对支气管细胞的潜在影响的研究（与非吸烟者进行对比）。

在本研究中，作者评估了吸烟者和非吸烟者 肺泡灌洗液 来源的 EVs内的miRNA谱以及对支气管上皮细胞的影响的差别。接着，作者分别给予BEAS-2B细胞吸烟者和非吸烟者的BAL内分离得到的EVs。作者发现吸烟者的EVs具有特殊的miRNA谱并且出现了miR-21, miR27a, let-7e 以及 let–7 g 表达的改变，也出现了它们的靶 mRNA表达的改变，比如磷酸酶和PTEN，NRF2，HMGA2或者其它与肺部疾病形成相关的基因比如KRAS，VEGF，EZH2，IL-6等等。它们也诱导促炎症细胞因子IL-6和IL-8的释放以及特异性肺癌生物标记物CYFRA21-1的释放。这些结果让我们能够更好的理解在疾病到来之前吸烟对于肺部疾病形成的机理。

RESULT

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1.从吸烟者和非吸烟者肺泡灌洗液中分离得到的EVs和它们的表征。

从 10个吸烟者和10个非吸烟者BALs的上清分离得到EVs。BALs的细胞组成经过检测在吸烟者和非吸烟者之间没有明显差异。作者为了证实提取的确实是EVs，分别用纳米粒子追踪分析（NTA），透射电子显微镜（TEM）以及用借助外泌体的markersCD9，CD81，CD63做WB进行验证。从

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