正文
0.05
）；肺泡灌洗液中
IL-6
、
IL-1β
、
TNF-α
和
NF-κB
水平均显著降低（
P
＜
0.05
）；肺组织
TLR4
和
p-p65/p65
蛋白表达水平显著降低（
P
＜
0.05
），呈剂量相关性。
结论
灵芝多糖能够通过抑制
TLR4/NF-κB
信号通路，从而减轻脓毒症大鼠炎症反应并保护肺功能。
脓毒症是感染引起的全身性炎症反应综合征，患者严重时会出现器官功能障碍
[1]
。肺脏是脓毒症患者最易受到损伤的器官之一。脓毒症可以引起急性肺损伤（
acute lung injury
，
ALI
），肺组织中大量炎性细胞浸润，免疫炎症反应失衡
[2-4]
。
Toll
样受体
4
（
toll like receptors 4
，
TLR4
）为
Toll
样受体亚型之一，可通过促进其下游靶点核因子
-κB
（
nuclearfactor-κB
，
NF-κB
）磷酸化活化，介导炎症反应。研究发现，抑制
TLR4/NF-κB
信号通路可减轻炎症反应，改善脓毒症肺损伤
[5]
。灵芝多糖是灵芝的主要活性成分之一，具有免疫调节、抗氧化、抗病毒、抗炎等作用
[6-7]
。灵芝多糖可通过抑制
ApoE
−/−
动脉粥样硬化小鼠
TLR4/NF-κB
信号通路，发挥调血脂作用
[8]
。本研究采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型，观察灵芝多糖对脓毒症大鼠肺功能的影响，并探讨其对
TLR4/NF-κB
信号通路的影响，以期为其治疗脓毒症提供依据。
1
材料
1.1
动物
SPF
级
SD
大鼠
60
只，雌雄各半，
6
周龄，体质量
200
～
220 g
，购自浙江中医药大学，许可证号
SYXK
（浙）
2019-0024
。动物于郑州大学附属郑州市中心医院动物房适应性饲养
1
周，通风良好、温度
25
℃、相对湿度
50%
。动物实验经郑州大学附属郑州中心医院动物伦理委员会批准（批准号
ZZCH-LL-2020072402
）。
1.2
药品与试剂
乌司他丁注射液（
5
×
10
4
U/mL
）购自广东天普生化医药股份有限公司；灵芝多糖对照品（质量分数≥
90%
，批号
180516
）、白细胞介素
-6
（
interleukin-6
，
IL-6
）试剂盒（批号
190118
）、
IL-1β
试剂盒（批号
180925
）、肿瘤坏死因子
-α
（
tumor necrosis factor-α
，
TNF-α
）试剂盒、
NF-κB
试剂盒购自北京索莱宝生物技术有限公司；
TLR4
抗体、
p65
抗体、
p-p65
抗体、
β-actin
抗体、羊抗兔
IgG
抗体购自美国
Abcam
公司；苏木素
-
伊红（
HE
）染色试剂盒、
BCA
蛋白定量试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司。
1.3
仪器
GEM3500
型全自动血气分析仪（美国沃芬有限公司）；
GL224/224i-1SCN
型电子天平（德国赛多利斯公司）；
MK3 Multiskan
型酶标仪（美国
Thermo Fisher Scientific
公司）；
DYCZ-25D
型蛋白电泳仪（北京六一仪器厂）；光学显微镜（日本
Nikon
公司）；无创肺功能仪（法国
EMKA
公司）。
2
方法
2.1
脓毒症模型的制备
随机选取
12
只
SD
大鼠作为对照组，其余大鼠采用盲肠结扎穿孔法
[9]
制备脓毒症模型。大鼠
ip 1.0%
戊巴比妥钠（
20 mg/kg
）麻醉，仰卧位固定，腹部消毒脱毛，沿正中腹白线切开皮肤，打开腹腔，找出盲肠，结扎盲肠末端和回盲瓣中间部位，使用
18
号针头在盲肠结扎处做
2
处穿刺，轻轻挤压盲肠，挤出部分肠内容物至腹腔，盲肠放入腹腔，逐层缝合，关闭腹腔。术后，大鼠
sc
生理盐水（
30 mL/kg
）进行液体复苏。对照组大鼠仅打开腹腔，游离盲肠，不结扎穿孔。脓毒症大鼠模型制备成功后，检测大鼠肺功能相关指标如潮气量（
