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简易版的果蝇动粒模型。红色为与动粒相连的纺锤丝(微管)。绿色、灰色及蓝色为构成动粒的蛋白质及蛋白复合体。马雷斯卡团队的拉力测量系统构建在CENP-C上。图片来源:参考文献[1]
科学家们显然无法在动粒上拴一个弹簧测力计来完成这样的任务。在这个研究中,马雷斯卡和他的博士生叶安娜(Anna Ye)以及斯图尔特·凯恩(Stuart Cane)三人巧妙地采用了类似的思路——他们构建了两种不同的力感受器,上面带有不同的荧光基团。这些感受器在受到拉力时会发生构象变化,荧光强度因而受到改变。通过将这两种力感受器嵌入果蝇动粒的重要结构——着丝粒蛋白CENP-C中,研究者得以通过分析荧光的改变情况估算施加在每个CENP-C蛋白上的拉力。
第一种力感受器基于荧光能量共振转移(FRET)效应设计。图a为原理示意:当青色荧光蛋白与黄色荧光蛋白的距离较远时,青色荧光蛋白吸收激发光的能量后发出青色荧光;但当青色荧光蛋白与黄色荧光蛋白距离较近(通常小于10nm)时,黄色荧光基团通过FRET效应获得能量,发出黄色荧光。图b为感受器示意图:青色荧光蛋白(mTurquoise2)和黄色荧光蛋白(mVenus)之间用弹性肽链相连,在所受拉力较小时,两个荧光蛋白距离较近,FRET效应较强;而受到较大拉力时,弹性肽链被拉长,两个荧光蛋白之间的距离变大,FRET效应减弱。通过比较细胞分裂间期和细胞分裂中期的结果,研究者最终得出平均每一个CENP-C蛋白受到约1.2-1.4pN的拉力。图片来源:a:semrock.com;b:参考文献[1]