正文
,
250mm
×
4.6 mm
,
5 μm
);
CM-5
型分光测色仪(日本柯尼卡美能达公司);实验用鼠耳打孔器(泽雅科教有限公司)。
1.2
试药
闹羊花药材(批号
20200103
)购自湖北富饶农业药用植物繁育基地,经成都中医药大学中药资源与鉴定系严铸云教授鉴定为杜鹃花科杜鹃属植物羊踯躅
R. molle
(Blume)
G. Don.
的干燥花。甲醇(色谱纯,美国
MTEDIA
有限公司),甲醇(分析纯,成都市科龙化工试剂厂),实验用水为超纯水,醋、黄酒购自永辉超市。闹羊花毒素
III
对照品(批号
11984-201901
)、闹羊花毒素
II
对照品(批号
11983-201901
)购自中国食品药品检定研究院(质量分数≥
98%
),闹羊花毒素
V
对照品(批号
DS7190922
)购自德思特生物有限公司(质量分数≥
98%
)。
1.3
动物
SPF
级昆明种小鼠
356
只,雌雄各半,
4
~
6
周龄,体质量
18
~
22 g
,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,动物许可证号
SCXK
(湘)
2019-0004
。动物饲养温度为(
20.0
±
0.5
)℃,湿度(
55
±
5
)
%
。本研究严格按照中华人民共和国科技部《动物实验管理条例》的要求进行。动物实验规程经重庆市中医院动物实验伦理委员会批准(批准号为
2019KY-GXH
)。
2
方法与结果
2.1
闹羊花不同炮制品的制备
根据古籍记载“遵古炮制”,具体炮制方法见表
1
。
2.2
闹羊花生品及不同炮制品颜色比较
2.2.1
肉眼观察
采用相机(佳能
Canon IXUS285HS
)对不同样品进行拍摄,见图
1
。结果可见,闹羊花生品为灰黄色,经炮制后均变为棕褐色,生品与炮制品的颜色差别较大,易区分,不同炮制品之间的颜色差异不明显。
2.2.2
颜色的测定
采用分光测色仪对闹羊花生品及其炮制品的颜色指标进行测量并记录。测量条件:光源
D
65
;标准观察角度是
10
°
;照明口径
Ф30 mm
;照明系统镜面反射。
L
*
代表明亮度,
L
*
越大,明亮度越大,反之越小;
a
*
代表红绿色度,+
a
*
为红色方向,反之为绿色方向,+
a
*
越大,则颜色越红,反之则颜色越绿;
b
*
代表黄蓝色度,+
b
*
为黄色方向,反之为蓝色方向,+
b
*
越大,则颜色越黄,反之则颜色越蓝
[6]
。
取闹羊花生品及不同炮制品,粉碎,过
2
号筛,取适量粉末放入色差仪粉末测试盒测定,见图
2
。结果表明,闹羊花炮制前后粉末的颜色存在较大差异,以
L
*
(亮度值)变化最大,其次是
b
*
(黄度值);不同炮制品(
S2
~
S4
)之间颜色无明显差异。
2.3
闹羊花毒素
II
、
III
、
V
的含量测定
2.3.1
混合对照品溶液的制备
分别精密称取闹
羊花毒素
II
、闹羊花毒素
III
、闹羊花毒素
V
对照品适量,加甲醇溶解,制成质量浓度分别为
860.09
、
670.06
、
310.03 μg/mL
的混合对照品溶液。
2.3.2
供试品溶液的制备
精密称取闹羊花药材粉末(过
4
号筛)
2.0g
,置于具塞锥形瓶中,精密加入
80%
甲醇
20 mL
,浸泡
20 min
,称定质量,超声提取
1 h
,放冷,再称定质量,用